加校正因子的主成分自身對照法說課講解.doc

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1、加校正因子的主成分自身對照法一、定義及適用范圍加校正因子的主成分自身對照法，即以主成分作為對照的內(nèi)標法，校正因子可以在檢測時測定，但需提供雜質(zhì)對照品，也可在建立方法時將測得的校正因子載入質(zhì)量標準，供以后常規(guī)檢驗使用，無需長期提供雜質(zhì)對照品，但也僅適用于已知雜質(zhì)的控制。建議：校正因子在0.8-1.2時可不予校正。校正因子計算公式：f=式中：f—校正因子；As—雜質(zhì)對照品峰面積或峰高；Cs—雜質(zhì)對照品濃度；Ar—待測成分對照品峰面積或峰高；Cr—待測成分對照品濃度。二、校正因子的測定在校正因子的研究和使用中，標準物質(zhì)、色譜條件、溶劑、檢測波長等均是重要的影響因素，研究中需要予以關注

2、。 2.1?校正因子的測定需要用到特定雜質(zhì)及主成分的標準物質(zhì)，這些標準物質(zhì)應具備量值準確的特點，符合標準物質(zhì)（對照品）的相關要求；其次，確定校正因子的分析方法應與最終確定的質(zhì)量標準方法一致，色譜條件等需經(jīng)篩選優(yōu)化后確定，如有變更，需考慮對校正因子的影響，必要時重新確定；第三，要關注影響待測物UV吸收的各種因素，如溶液制備所用溶劑最好與最終確定的流動相相同，檢測波長最好在特定雜質(zhì)及主成分UV曲線的峰或谷處，避開吸收值急劇變化波段，以保證測定方法具有較好的耐用性，并保持測定結果的恒定。 2.2?一般情況下，校正因子可視具體情況通過如下幾種方法確定： （1）單濃度點測定：制備適當濃度

3、的特定雜質(zhì)對照品溶液和主成分對照品溶液，分別進樣測定，照上式計算，得到校正因子。 （2）多濃度點測定：制備適當?shù)母?、中、低三水平濃度的特定雜質(zhì)對照品溶液和主成分對照品溶液（涵蓋定量限、標準限度），分別進樣測定，照上式計算各校正因子，計算RSD，求平均值，得到校正因子。 （3）標準曲線法測定：精密稱取雜質(zhì)對照品和主成分對照品，分別制備系列溶液（涵蓋定量限、標準限度），分別進樣后，按最小二乘法以進樣量對響應值（峰面積等）進行線性回歸，求得兩條標準曲線，兩曲線斜率之比即為校正因子。 （4）吸收系數(shù)比值法：對于UV檢測器來講，兩物質(zhì)的相對校正因子實際上也是兩物質(zhì)以流動相為溶劑，在檢測波

4、長處的紫外吸收系數(shù)E1%1cm之比，故可按吸收系數(shù)法測定法的相關技術要求測定各自吸收系數(shù)，如對照品級別的標準物質(zhì)、高中低三水平濃度測定、吸收度介于0.3～0.8之間、至少5臺不同型號的UV分光光度計、2份供試液同時平行制備測定、同臺儀器2份供試液的平行測定結果不超過±0.5%等。測定兩物質(zhì)的吸收系數(shù)后，經(jīng)統(tǒng)計分析確定兩物質(zhì)吸收系數(shù)，計算比值，求得校正因子。 上述各方法中，（1）和（2）法較為簡捷，可以快捷地量化特定雜質(zhì)與主成分紫外吸收特征的差異，多用于評估采用主成分自身對照法定量雜質(zhì)時是否需要校正。但如采用加校正因子的主成分自身對照法定量雜質(zhì)，需將標準物質(zhì)賦值信息轉(zhuǎn)化為校正因子

5、固化在質(zhì)量標準中，那么校正因子的準確性非常關鍵，校正因子的準確計算應符合更為嚴格的要求，需要考慮并控制求算校正因子過程中的各種誤差因素，以及儀器通用性和色譜系統(tǒng)的耐用性等因素，以便使求得的常數(shù)更為準確并具代表性，此時采用（3）、（4）法更為適宜，如能考慮到測定人員、不同試驗室因素的影響，會更加符合常數(shù)求算的基本要求。三、方法驗證校正因子的測定屬于有關物質(zhì)方法驗證中的一個項目，一般采用有關物質(zhì)的測定方法，雜質(zhì)對照品和主成分對照品線性濃度從定量限至限度的120%或150%，一般取5-6個點，使用3臺不同的儀器測定，按照上述方法（3），計算平均校正因子。有關物質(zhì)方法學驗證主要包括：系

6、統(tǒng)適用性、方法專屬性、精密度（儀器精密度、方法精密度和中間精密度）、線性、準確度（已知雜質(zhì)的回收試驗）、檢測限和定量限、溶液穩(wěn)定性和耐用性。試驗內(nèi)容概念溶液配制份數(shù)進樣針數(shù)評定標準系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性是對分析設備、電子儀器與實驗操作、測試樣品等整個系統(tǒng)進行評估的指標空白溶液1份供試液1份進1針進6針雜質(zhì)峰峰面積RSD≤2.0%，保留時間RSD≤1.0%；雜質(zhì)峰的拖尾因子≤2.0%，理論塔板數(shù)應符合質(zhì)量標準的規(guī)定方法專屬性1空白對照1份輔料溶液（或起始原料、中間體）1份供試液1份每份各1針空白對照無干擾；主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度＞2.0專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔料等

7、）可能存在下，采用的分析方法能夠正確鑒定檢出被分析物質(zhì)的特性方法專屬性2未破壞樣品、光濕熱10天破壞樣品和酸堿氧化破壞樣品各1份每份供試液進1針；空白溶液、酸堿空白及氧化空白各1針降解雜質(zhì)峰與主峰的分離度≥2.0精密度在規(guī)定的測試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進行一系列檢測所得結果之間的接近程度（離散程度）儀器精密度在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內(nèi)，由同一分析人員測定所得結果的精密度1%對照液儀器精密度進6針峰面積RSD≤2.0%供試液儀器精密度進6針（同系統(tǒng)適用性）峰面積RSD≤2