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《液相色譜的分離機理及色譜柱.說課材料.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、液相色譜的分離機理及色譜柱.極性問題液相色譜的分離機理正相反相體積排除離子交換其他不同的分離模式是不同的機理吸附色譜的分離機理隨著樣品在固定相上的吸附能力由大到小在色譜柱上的保留由長到短吸附色譜概述分離基于樣品的極性差異。洗脫次序∶一般為正相，即：極性低的先被洗脫常用的流動相∶非極性有機溶劑，如己烷乙酸等為添加劑常用固定相∶硅膠、氧化鋁等。分配色譜的分離機理分配色譜概述反相色譜的主要類型，基于分子的極性分離洗脫次序：一般為反相，即極性高的先被洗脫常用的流動相：有機溶劑如甲醇、乙腈，水應用添加劑，成為離子對、離子抑制方法常用固定相：碳十八、碳八、胺基等基團反相色譜固定相
2、多為鍵合相?鍵合相色譜柱以硅膠為基質(zhì)，通過化學鍵合方式把碳十八、碳八、胺基等基團聯(lián)在基質(zhì)上，作為固定相。優(yōu)點∶固定相穩(wěn)定，不易流失應用廣泛，可使用多種溶劑消除硅羥基的不良影響缺點∶pH值不能小于3同樣填料，各種牌號色譜柱不盡相同體積排除色譜的分離機理凝膠色譜概述凝膠滲透（GPC）、凝膠過濾（GFC）分離基于分子在溶液中的體積大小洗脫次序：大分子先被洗脫流動相不參與分離，只起溶劑作用分離效率低色譜行為容易預測GPC的校正分子量大于V0或小于Vt的分子不能分離液相色譜柱及分離機理的關系從色譜方法上分正相/反相離子交換分子體積排除親合從柱子類型上分分配/吸附離子交換凝膠親合
3、液相色譜的方法開發(fā)（二）梯度方法梯度洗脫的特點優(yōu)點單位時間的分離能力增加檢測靈敏度提高缺點儀器設備要求高不適合某些檢測方式柱需再生定量分析的重復性較低如不用梯度：分離不理想梯度條件的優(yōu)化檢測器對檢測器的要求高靈敏度可重現(xiàn)的設置合適的帶寬快速或可變的時間常數(shù)寬的線性響應容易使用及保養(yǎng)自我診斷功能檢測器的種類衡量檢測器的指標靈敏度∶S=△R/△Q△R是檢測器響應值的增量△Q是樣品量的增量噪音∶沒有樣品時檢測器的最大輸出信號漂移∶檢測器在一段時間內(nèi)響應值的變化線性動態(tài)范圍∶最大線性相應與最小檢出限之比最小檢測限∶樣品產(chǎn)生兩或三倍于噪音信號時的濃度信噪比∶S/N注意∶最小檢測
4、限不是一個單純的檢測器指標。它實際上是評價整個色譜系統(tǒng)的指標，包括了色譜系統(tǒng)、分離機理、色譜柱在內(nèi)的綜合性指標，信噪比亦如此紫外-可見光檢測器基于樣品池(S)中的樣品對光產(chǎn)生吸收，有信號差如是可變波長檢測器，還有分光系統(tǒng)(光珊)Beer'sLaw-BEER定律光能量∶P0=透過溶劑的光能量P=透過樣品的光能量光通量(透過率%)∶T=P/P0吸光度∶A=-log(T)=log(P0/P)吸光度=單位吸光度×流動池長度×溶液濃度即∶A=abc同紫外檢測器靈敏度有關的因素信號強度(S)從BEER定律可看出樣品的種類樣品濃度及進樣的體積檢測池的長度所使用的波長，檢測器的 時間
5、常數(shù)噪音(N)流動相所使用的波長，燈的能量檢測器的時間常數(shù)非檢測器因素-電噪音，泵脈動等紫外檢測器的溶劑影響不同種類溶劑有其截止波長溶劑的質(zhì)量好壞對其截止波長有影響為何溶劑質(zhì)量不好?含紫外吸收的雜質(zhì)溶解在其中的氧氣緩沖液溶質(zhì)的紫外吸收示差折光檢測器DifferentialRefractiveIndexDetector示差檢測器的注意事項不能做梯度實驗最大的池耐壓是100psi流速范圍是0.3-10ml/min.液相色譜的定性及定量技術色譜峰定性鑒別每個色譜峰通過比較保留值(通常是保留時間)的方法，找到各色譜峰所對應的組份大多數(shù)情況下用比較保留時間來定性即所謂：保留時間
6、相同，可能是同樣的組份保留時間不同，肯定不是同樣的組份用保留時間定性用“標樣”的保留值定出被測組份的位置進一步的確認標準加入同時用其他方法其他色譜方法（改變機理，如：用不同的色譜柱）其他檢測器PDA，光譜圖比較、譜庫檢索MS，質(zhì)譜圖解析、譜庫檢索其他儀器方法定量分析的具體內(nèi)容確定樣品的類型，主要成分/痕量成分使分析條件的分離度（R）大于：1.5色譜峰的定性，峰一致性測定檢測限及定量限：確定靈敏度及線性范圍用標樣建立標準曲線檢查方法的準確度及精確度用標樣定期檢查方法痕量分析如信/噪比不夠，定量的精確度會受影響，因此要：分析前濃縮樣品選擇高靈敏度檢測器用衍生法使色譜體系最
7、優(yōu)化使用短的微徑柱（減少樣品的稀釋）使用高效色譜柱使k'值盡可能小增加進樣體積和濃度使用低流速（N增加）采用梯度淋洗常用的定量方法峰面積百分比法由于檢測技術的影響，在液相色譜中不常用外標法在液相色譜中用的最多內(nèi)標法準確，但是麻煩在標準方法中用的最多外標法定量配制一系列已知濃度的標樣外標法定量（二）實際色譜圖標準曲線外標法定量（三）計算公式特點無需各組份都被檢出、洗脫需要標樣標樣及樣品測定的條件要一致進樣體積要準確內(nèi)標法定量（一）配制一系列濃度的標樣，其中加有內(nèi)標樣內(nèi)標法定量（二）實際色譜圖標準曲線內(nèi)標法定量（三）計算公式：特點：無需各組份都被檢出、洗
