表皮生長因子對(duì)糖尿病大鼠角膜上皮損傷修復(fù)影響探究

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1、表皮生長因子對(duì)糖尿病大鼠角膜上皮損傷修復(fù)影響探究　　[摘要]目的：探討表皮生長因子對(duì)糖尿病大鼠角膜上皮損傷修復(fù)的影響。方法：將SD雄性大鼠28只隨機(jī)分為正常未治療組（6只）、正常治療組（6只）、糖尿病未治療組（8只）、糖尿病治療組（8只）。采用鏈脲佐菌素（STZ）65mg/kg左下腹腔一次性注射制作糖尿病大鼠模型。4周后，將大鼠全麻后制作右眼角膜上皮損傷模型，損傷后0h，12h，18h，24h分別行角膜熒光素染色顯示損傷的區(qū)域，眼前節(jié)分析系統(tǒng)照相并分析損傷區(qū)域的面積。結(jié)果：角膜上皮損傷修復(fù)速度糖尿病組比正常組慢，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。結(jié)論

2、：糖尿病可使大鼠角膜上皮損傷修復(fù)延遲，但因角膜上皮修復(fù)較快，表皮生長因子促進(jìn)糖尿病大鼠角膜上皮損傷修復(fù)的影響不明顯。[關(guān)鍵詞]表皮生長因子糖尿病角膜上皮糖尿?。╠iabetesmellimus，DM6）是一種由于胰島素不足或胰島素抵抗而導(dǎo)致血糖增高及其他代謝紊亂。DM全身有多種并發(fā)癥，糖尿病性角膜病變是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，而且能夠造成視覺威脅。研究DM角膜上皮的修復(fù)機(jī)制具有重要的臨床意義。表皮生長因子是一種廣泛存在于人或其他動(dòng)物體內(nèi)的小分子多肽，它可促進(jìn)皮膚和角膜的修復(fù)，它在傷口愈合中能刺激角膜上皮細(xì)胞增殖、趨化和移行。本文研究表皮生長因子對(duì)糖尿病大

3、鼠上皮損傷修復(fù)的影響。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組健康雄性SD大鼠28只，購自福建醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，體質(zhì)量（200±20）g，隨機(jī)分為正常未治療組（6只）、正常治療組（6只）、糖尿病未治療組（8只）、糖尿病治療組（8只）。1.2糖尿病動(dòng)物模型制作糖尿病組大鼠采用鏈脲佐菌素（streptozocin，STZ）造模，造模前一天晚上開始禁食（12h），只供給飲水。STZ配置：用pH4.2～4.50.1mol/L檸檬酸緩沖液配制成10g/L，按65mg/kg體質(zhì)量腹腔一次性注射STZ。48h后取尾血測血糖，凡血糖>16.5mmol/L的大鼠為糖尿病模型成

4、功。血糖16.5mmol/L，即誘導(dǎo)成功。1.3角膜上皮損傷模型制作大鼠水合氯醛腹腔注射麻醉，顯微鏡下將直徑為3mm角膜上皮環(huán)鉆安放于角膜中央，注入20%乙醇浸泡20秒后環(huán)形鉆取角膜上皮層，注意避免損傷其下的基底膜和基質(zhì)層，即制成直徑為3mm的角膜上皮損傷模型。1.4角膜上皮損傷修復(fù)觀察6造模后12h、18h、24h，用1%熒光素行角膜熒光染色，采用裂隙燈圖像分析系統(tǒng)拍照，分析大鼠角膜熒光染色陽性的面積，每只大鼠拍攝3張照片，取平均值作為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，大鼠角膜熒光染色陽性的面積數(shù)據(jù)以表示，采用單因素

5、ANOVA檢驗(yàn)；以P0.05）；24h時(shí)正常治療組與DR未治療組，正常治療組與DR治療組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P0.05）（見表1）。3討論本研究發(fā)現(xiàn)，角膜上皮損傷修復(fù)速度糖尿病組比正常組慢，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。角膜上皮層，規(guī)律地排列于角膜外表面，在維持角膜透明度等方面發(fā)揮著重要的作用[1]6。糖尿病可以引起全身的組織和器官病變，隨著糖尿病的進(jìn)展，角膜也會(huì)受到影響。糖尿病性角膜病變是糖尿病的主要并發(fā)癥之一，而且能夠造成視覺威脅。研究表明，大于70%的糖尿病病人出現(xiàn)角膜異常[2]，并且主要涉及角膜神經(jīng)和角膜上皮[3]。角膜上皮創(chuàng)傷愈合包括細(xì)胞最初粘附于

6、基質(zhì)層、遷移、增生和覆蓋創(chuàng)傷區(qū)域等一系列高度組織的活動(dòng)。上述過程任何一階段的功能失調(diào)都可能導(dǎo)致角膜上皮創(chuàng)傷愈合延遲。糖尿病角膜上皮創(chuàng)傷愈合的機(jī)制并不明確，但是，糖尿病角膜病變的病理學(xué)研究表明，其與角膜上皮細(xì)胞和基底膜之間的相互作用改變、基底膜對(duì)基質(zhì)的異常附著以及半橋粒形成區(qū)域的改變有關(guān)[4]。角膜上皮損傷修復(fù)速度糖尿病組比正常組慢，考慮糖尿病大鼠中E-選擇素水平增高，從而抑制了角膜上皮損傷的修復(fù)。本研究發(fā)現(xiàn)，治療組的角膜上皮損傷修復(fù)速度比未治療組快，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表皮生長因子是一種廣泛存在于人或其它動(dòng)物體內(nèi)的小分子多肽，極微量即能強(qiáng)烈刺激細(xì)胞生長

7、，抑制衰老基因的出現(xiàn)，延緩表皮細(xì)胞衰老。它可促進(jìn)皮膚和角膜的修復(fù)，它在傷口愈合中能刺激角膜上皮細(xì)胞增殖、趨化和移行。角膜上皮損傷后幾小時(shí)，白細(xì)胞就可到達(dá)損傷區(qū)[5]。表皮生長因子中含有很多成分，其中P物質(zhì)在糖尿病角膜創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮著重要的作用（P物質(zhì)，一種由三叉神經(jīng)分泌的感覺神經(jīng)遞質(zhì)，存在于人類的淚液中[4]）。研究表明，在活體外試驗(yàn)和體內(nèi)試驗(yàn)中單獨(dú)給予IGF-1并不影響角膜的上皮創(chuàng)傷愈合，但在器官培養(yǎng)和體內(nèi)試驗(yàn)中證明，P物質(zhì)和IGF-1聯(lián)合用藥可以協(xié)同性地促進(jìn)角膜上皮創(chuàng)6傷愈合[6]。尤其是在糖尿病大鼠模型中。而E-選擇素對(duì)角膜上皮損傷修復(fù)起抑制作用，

8、已有許多研究證明，糖尿病可引起E-選擇素水平增高，高血糖能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)E