血型鑒定(1)教學(xué)文案.ppt

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1、血型鑒定(1)血型鑒定目的掌握紅細(xì)胞ABO血型及Rh血型鑒定原理ABO血型鑒定：根據(jù)紅細(xì)胞上有無A抗原或（和）B抗原，以及血清中有無抗A及抗B，可以將血型分為A型、B型、AB型、O型四種，利用紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)通過正定型、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。Rh血型鑒定：IgM型鹽水抗D試劑能夠與D陽性紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中形成肉眼可見的凝集。原理試劑抗A及抗B血清（商品試劑）5%A型和B型紅細(xì)胞（試管法）10%A型和B型紅細(xì)胞（玻片法）IgM型鹽水抗D試劑標(biāo)本抗凝靜脈血EDTA-K2紅細(xì)胞ABO血型鑒定（試管法正定型）標(biāo)記兩支干凈的試管-A和-B在標(biāo)記為-A的試管中加1滴抗A試劑。在標(biāo)記為-B的試

2、管中加1滴抗B試劑。在每個(gè)試管中各加入5%受檢者紅細(xì)胞懸液(1份壓積紅細(xì)胞+19份0.9%鹽水)輕輕混勻，1000g離心1分鐘。檢查上清液是否有溶血。輕輕重懸細(xì)胞扣，檢查凝集。紅細(xì)胞ABO血型鑒定（試管法反定型）標(biāo)記兩支干凈的試管Ac和Bc每管加入2滴受檢者血清。在標(biāo)記Ac的試管中加入1滴5%A型試劑紅細(xì)胞。在標(biāo)記Bc的試管中加入1滴5%B型試劑紅細(xì)胞。輕輕混勻，1000g離心1分鐘。檢查上清有無溶血。輕輕重懸細(xì)胞扣，檢查凝集。判斷并記錄結(jié)果。紅細(xì)胞ABO血型鑒定（玻片法）在標(biāo)記的玻板上分別加一滴抗A、抗B。各加一滴10%受檢者紅細(xì)胞懸液(1滴壓積紅細(xì)胞+9滴0.9%鹽水)輕輕混勻

3、，室溫放置2-15分鐘。觀察并記錄結(jié)果：凝集為陽性結(jié)果，不凝集為陰性結(jié)果，對(duì)結(jié)果有懷疑，應(yīng)用試管法重新實(shí)驗(yàn)。紅細(xì)胞Rh血型鑒定試管法標(biāo)記一支75×12mm的試管加入抗D血清1滴，加1滴5%的待檢細(xì)胞。輕輕混勻，1000g離心1分鐘，或3000r/min，15秒。檢查是否溶血，然后輕輕重懸細(xì)胞扣，檢查凝集玻片法在玻板上標(biāo)記待檢紅細(xì)胞編號(hào)。加入抗D血清1滴于標(biāo)記玻片中。將35－45%的待檢細(xì)胞1滴滴入玻片并混勻。室溫放置2分鐘左右觀察結(jié)果。結(jié)果判讀（ABO血型鑒定）正定型反定型血型抗A抗BA細(xì)胞B細(xì)胞O細(xì)胞--++-O+--+-A-++--B++---AB結(jié)果判讀（Rh血型鑒定）陽性對(duì)

4、照陰性對(duì)照待檢細(xì)胞結(jié)果+-+++---報(bào)告方式XXX型，Rh+/-注意事項(xiàng)玻片、試管都要標(biāo)記！?。及B標(biāo)準(zhǔn)血清絕對(duì)不能相混,不要依靠用染料顏色標(biāo)記血清。所用玻片、試管實(shí)驗(yàn)前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。紅細(xì)胞懸液滴管頭不能接觸標(biāo)準(zhǔn)血清液面，一般先加血清，再加紅細(xì)胞懸液，便于核實(shí)是否漏加血清。離心時(shí)間、速度嚴(yán)格要求。要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時(shí)應(yīng)注意觀察凝集強(qiáng)度，有助于A、B亞型的發(fā)現(xiàn)，觀察后立即記錄?？贵w篩選目的掌握抗體篩選的試驗(yàn)方法鹽水試驗(yàn)法白蛋白介質(zhì)法低離子強(qiáng)度介質(zhì)法（LISS）酶技術(shù)抗球蛋白試驗(yàn)聚凝胺促凝技術(shù)PEG促凝技術(shù)原理抗人球蛋白法：Ig

5、G類抗體，由于其分子量小，與紅細(xì)胞結(jié)合以后在鹽水介質(zhì)中不發(fā)生肉眼可見的凝集，稱為不完全抗體。但在加入抗-IgG的抗體后，以其搭橋則可出現(xiàn)凝集。試劑抗球蛋白試劑陽性對(duì)照血清陰性對(duì)照血清O型紅細(xì)胞生理鹽水標(biāo)本：抗凝靜脈血（EDTA-K2）操作步驟在標(biāo)記好的試管中各加入兩滴血漿和一滴5%的O型紅細(xì)胞，混勻。于370C孵育一小時(shí)。用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞4-6次，完全傾盡末次洗滌鹽水。向得到的干細(xì)胞扣中加入1-2滴抗球蛋白試劑。1000rpm，離心1分鐘。檢查凝集并記錄結(jié)果。結(jié)果判讀加入抗球蛋白試劑后，如紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集或溶血，則結(jié)果為陽性。加入抗球蛋白試劑后結(jié)果為陰性，而加入直抗陽性對(duì)照細(xì)胞后

6、呈陽性反應(yīng)，則結(jié)果為陰性。如加入直抗陽性對(duì)照細(xì)胞后呈陰性反應(yīng)，則結(jié)果不可靠，必須重復(fù)檢測(cè)。操作步驟陽性對(duì)照管待檢管陰性對(duì)照管IgG型抗D1待檢血清2陰性對(duì)照血清25%O型試劑紅細(xì)胞111在標(biāo)記好的試管中按下表加入試劑及血清。ABO血型鑒定不規(guī)則抗體篩選玻片法（正定型）試管法（正定型,反定型）鹽水法聚凝胺法抗人球法微柱凝集試驗(yàn)技術(shù)達(dá)亞美微量定型系統(tǒng)凝膠測(cè)試法基于生物化學(xué)凝膠過濾技術(shù)和離心技術(shù)及免疫化學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)。當(dāng)抗原抗體反應(yīng)，抗人球試驗(yàn)時(shí)血細(xì)胞發(fā)生凝集。離心時(shí)凝集塊不能通過凝膠間隙而在凝膠上層，呈陽性反應(yīng)，未凝集細(xì)胞離心時(shí)可通過凝膠間隙而在凝膠底部，呈陰性反應(yīng)。DiaMed卡

7、法結(jié)果判讀4＋在凝膠柱頂端形成單一層凝集細(xì)胞。3＋凝集層主要位于凝膠柱上1/3。2＋凝集位于整個(gè)凝膠柱，底部?jī)H有較少細(xì)胞。1＋凝集層位于凝膠柱下1/3。凝膠中細(xì)胞沒有凝集或溶血視為陰性。思考題1.紅細(xì)胞ABO血型鑒定正反定型不一致原因2.導(dǎo)致Rh血型鑒定出現(xiàn)假陽性和假陰性原因3.抗體篩選的臨床意義交叉配血CrossMatch目的掌握交叉配血的試驗(yàn)方法原理鹽水法檢查供受者之間有無ABO血型不合。用于抗體篩選陰性和不同血型骨髓移植患者的輸血。原理凝聚胺法凝聚胺是一種高價(jià)陽