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1、感冒疏風顆粒微生物限度檢查方法學驗證 摘要：目的：建立感冒疏風顆粒微生物限度檢查方法。方法：按《中國藥典》2010版的要求[1]，通過接種代表性的陽性菌株，用常規(guī)法、稀釋法及薄膜過濾法對五株陽性菌株進行回收率測定。結果：該樣品沒有抑菌性，常規(guī)法、稀釋法及薄膜過濾法對五株陽性菌株回收率均高于70%。結論：本樣品細菌數(shù)、霉菌數(shù)和酵母菌數(shù)及控制菌大腸埃希菌均可采用常規(guī)法進行檢查。關鍵詞：感冒疏風顆粒；微生物限度檢查；回收率；方法學驗證中圖分類號：R284.2文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2013）08-0059-02感冒疏風顆粒具有辛溫解表，宣肺和中的功能[2]。臨床用
2、于治療風寒感冒，發(fā)熱咳嗽，頭痛怕冷，鼻流清涕，骨節(jié)酸痛，四肢疲倦。當建立產(chǎn)品的微生物限度檢查法時，應進行細菌、霉菌及酵母菌數(shù)計數(shù)方法的驗證，以確認所采用的方法適合于該產(chǎn)品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測定[1]。本文通過接種代表性的五株陽性菌株，采用常規(guī)法、稀釋法及薄膜過濾法進行微生物限度檢查方法學驗證實驗，為該樣品建立了微生物限度檢查方法。1儀器與材料51.1儀器HTY-2000A集菌儀（杭州高得醫(yī)療器械有限公司）；開放式集菌器（北京牛牛基因技術有限公司，批號：20101005）。1.2樣品感冒疏風顆粒（云南雄業(yè)制藥有限公司，規(guī)格/袋，批號20110101，20110102，2011
3、0103，20101001，20101105）。1.3培養(yǎng)基和試劑改良馬丁液體培養(yǎng)基（批號，1011042），改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（批號，010315），玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號，110208），營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號，110120），營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號，101224），膽鹽乳糖增培養(yǎng)基（批號，101226），北京三藥科技開發(fā)公司。1.4菌種大腸埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC（F）44102]、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）[CMCC（B）63501]、金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）[CMCC（B）26003]、白色
4、念珠菌（Candidaalbicans）[CMCC（F）98001]、黑曲霉（Aspergillusniger）[CMCC（F）98003]（中國藥品生物制品檢定所提供）2方法按中國藥典2010版一部微生物限度檢查法（附錄XⅢC）[1]進行實驗。2.1菌液制備取經(jīng)34℃培養(yǎng)18～24h，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌肉湯液體培養(yǎng)物1mL，加入95mL0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5～10-7備用；取經(jīng)24℃培養(yǎng)18～24h的白色念珠菌液體培養(yǎng)物1mL，加入9mL0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-6備用；取經(jīng)培養(yǎng)一周的黑曲霉菌斜面物，加0.9%氯化鈉溶液3
5、mL，洗下孢子，轉移至另一空管，標準比濁后，取1mL加入0.9%氯化鈉溶液中10倍稀釋至10-4備用。2.2菌液的檢驗取上述金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸埃希菌10-5～10-7稀釋液各1mL，用45℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基20mL注皿，各平行測定兩皿，30～35℃培養(yǎng)48h，計數(shù)，應約為50～100cfu/mL；取上述白色念珠菌10-5～10-6稀釋液及上述黑曲霉菌10-4孢子懸液各1mL，用45℃玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基20mL注皿，各平行測定兩皿，23～28℃培養(yǎng)，逐日觀察計數(shù)，應約為50～100cfu/mL。結果見表1。2.3供試液制備取樣品10mg，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖
6、液100ml，用勻漿議混勻，作為1：10的供試液。2.4回收率的測定2.4.1細菌數(shù)霉菌數(shù)常規(guī)法測定試驗組：取1：10供試液1mL、50～100cfu試驗菌同時加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24～72h逐日觀察結果。菌液組：測定每一菌株所加的試驗菌數(shù)（同菌液檢驗）。供試品對照組：取1：10供試液15mL加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24～72h逐日觀察結果，測定供試品本底菌數(shù)2.4.2細菌數(shù)霉菌數(shù)稀釋法測定試驗組：取1：10供試液0.2mL/皿、50～100cfu試驗菌同時加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)
7、24～72h逐日觀察結果。菌液組：測定每一菌株所加的試驗菌數(shù)（同菌液檢驗）。2.4.3細菌數(shù)霉菌數(shù)薄膜過濾法測定取1：10的供試液1mL，注入開放式濾器（先用少量緩沖液潤濕濾器），用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每次100mL共4次（每次充分振搖濾器，總沖洗400mL），留有少量緩沖液加1mL（50～100cfu）試驗菌混勻，抽干后，取出濾膜菌面朝上貼入規(guī)定瓊脂平板培養(yǎng)基中，置規(guī)定溫度培養(yǎng)48h，結果見表2。2.5回收率的計算按如下公式計算試驗組的加菌回收率：試驗組
