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1、葡萄皮中多酚類化合物提取工藝優(yōu)化 摘要：采用熱浸提法從葡萄（Vitisvinifera）皮中提取多酚類化合物，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察提取溶劑、浸提溫度、浸提時(shí)間和料液比等因素對(duì)多酚提取量的影響，優(yōu)化提取條件。結(jié)果表明，優(yōu)化的葡萄皮中多酚類化合物的提取條件為體積分?jǐn)?shù)100%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液（體積比1∶1∶1）作提取溶劑、料液比m葡萄皮∶V提取溶劑=1∶14（g/mL）、浸提溫度60℃、浸提時(shí)間40min，所得葡萄皮中多酚類化合物的提取量為16.866mg/g。關(guān)鍵詞：葡萄（Vitisvinifera
2、）皮；多酚類化合物；熱浸提法；優(yōu)化中圖分類號(hào)：S663.1；R284.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0439-8114（2013）15-3622-03多酚類化合物是葡萄中的主要活性物質(zhì)之一，大部分存在于葡萄皮和子中[1]。研究顯示因釀酒方式及葡萄品種不同每千克葡萄皮中多酚類化合物含量可達(dá)285～550mg[2]，目前葡萄子中多酚的提取和應(yīng)用已有大量的研究，而葡萄皮作為一種重要的多酚資源，其相關(guān)研究報(bào)道相對(duì)較少。本研究以釀酒后分離的葡萄皮為原料，采用混合溶劑提取其中的多酚類化合物，并對(duì)提取條件進(jìn)行了優(yōu)化。1材料與方法81
3、.1主要材料、試劑與儀器葡萄皮：釀酒后分離出的葡萄皮，在70℃恒溫干燥后用粉碎機(jī)將其粉碎備用。焦性沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品、甲醇、乙醇、丙酮、鹽酸、硫酸亞鐵、酒石酸鉀鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀均為分析純，購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠。主要儀器包括722N型可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海綠宇生物科技有限公司），YXQ-LS-30S11型高速粉碎機(jī)（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），HH-S24型真空干燥箱（深圳市三利化學(xué)有限公司），JY2502型電子天平、DK-S24型電熱恒溫水浴鍋（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、BCD-231型冰箱（伊萊
4、克斯），80-2型高速離心機(jī)（金壇大地自動(dòng)化儀器廠）。1.2試驗(yàn)方法1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確稱取0.5g焦性沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，加蒸餾水溶解并移入100mL容量瓶中定容，在6支100mL容量瓶中分別加入5.0g/L沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液0、1、2、3、5、10mL，加入蒸餾水定容至100mL，在波長(zhǎng)540nm處測(cè)吸光度A，以吸光度為縱坐標(biāo)（y）、沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度（x//g/L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），得到?jīng)]食子酸質(zhì)量濃度對(duì)吸光度的回歸方程為y=0.6980x-0.0035，復(fù)相關(guān)系數(shù)r2=0.9966，表明線
5、性關(guān)系良好。1.2.2熱浸提法提取葡萄皮中的多酚類化合物稱取1g葡萄皮粉，加入20mL提取溶劑，60℃水浴浸提18h后趁熱離心，取上清液，定容至25mL，吸取1mL測(cè)定多酚類化合物的含量，平行測(cè)定3次。1.2.3單因素試驗(yàn)設(shè)置單因素試驗(yàn)分別考察提取溶劑、提取溶劑濃度、浸提時(shí)間、浸提溫度和料液比（m葡萄皮∶V提取溶劑，g/mL，下同）對(duì)多酚提取量的影響。①提取溶劑。精確稱取1g葡萄皮粉6份，分別加入20mL蒸餾水、乙醇、甲醇、甲醇—乙醇—丙酮混合溶液（體積比1∶1∶1）、甲醇—水—鹽酸混合溶液（體積比80.0∶19.
6、9∶0.1）、乙酸乙酯，60℃水浴浸提1h后趁熱離心，取上清液用體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液定容至25mL，吸取1mL測(cè)定多酚類化合物的含量，計(jì)算多酚提取量。②提取溶劑濃度。精確稱取1g葡萄皮粉6份，加入10mL體積分?jǐn)?shù)分別為0%、20%、40%、60%、80%、100%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液，60℃水浴浸提1h，離心后取上清液定容至25mL，吸取1mL測(cè)定多酚類化合物的含量，計(jì)算多酚提取量。③浸提時(shí)間。精確稱取1g葡萄皮粉6份，加入10mL體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液，60℃水浴中分別
7、浸提10、20、30、40、50、60min，趁熱離心，取上清液定容至25mL，吸取1mL測(cè)定多酚類化合物的含量，計(jì)算多酚提取量。④浸提溫度。精確稱取1g葡萄皮粉7份，加入10mL體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇—乙醇—丙酮混合溶液，分別在30、40、50、60、70、80、90℃水浴中浸提308min，趁熱離心，取上清液定容至25mL，吸取1mL測(cè)定多酚類化合物的含量，計(jì)算多酚提取量。⑤料液比。精確稱取1g葡萄皮粉6份，分別按1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14的料液比加入體積分?jǐn)?shù)80%的甲醇—乙醇—丙酮混合
8、溶液，60℃水浴浸提30min，趁熱離心，取上清液定容至25mL，吸取1mL測(cè)定多酚類化合物的含量，計(jì)算多酚提取量。1.2.4正交試驗(yàn)設(shè)置四因素三水平正交試驗(yàn)，考察甲醇—乙醇—丙酮混合溶液的體積分?jǐn)?shù)、浸提溫度、浸提時(shí)間、料液比對(duì)多酚提取量的影響[5]，正交試驗(yàn)因素與水平見(jiàn)表1。1.2.5多酚類化合物含量的測(cè)定采用酒石酸亞鐵法測(cè)定提取液中多酚類化合物的含量[3
