血清學(xué)試驗(yàn) 血清學(xué)診斷.ppt

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1、動(dòng)物微生物血清學(xué)診斷動(dòng)物微生物血清學(xué)試驗(yàn)的概念由于抗體主要存在于血清中，所以將體外發(fā)生的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)稱(chēng)為血清學(xué)反應(yīng)或血清學(xué)試驗(yàn)。動(dòng)物微生物血清學(xué)試驗(yàn)的特點(diǎn)特異性和交叉性敏感性可逆性反應(yīng)的二階段性最適比例與帶現(xiàn)象用已知測(cè)未知?jiǎng)游镂⑸锾禺愋院徒徊嫘蕴禺愋钥乖荒芘c相應(yīng)抗體結(jié)合，而不能與其他抗體相結(jié)合。交叉性?xún)煞N不同的抗原之間含有共同的抗原決定簇，則發(fā)生交叉反應(yīng)。動(dòng)物微生物反應(yīng)的二階段性第二階段抗原抗體復(fù)合物出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)階段。此階段反應(yīng)慢、需數(shù)分鐘、數(shù)十分鐘或更久。第一階段抗原與抗體的特異性結(jié)合

2、階段，此階段反應(yīng)快、僅數(shù)秒至數(shù)分鐘，但不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。動(dòng)物微生物敏感性抗原抗體的結(jié)合還具有高度敏感性的特點(diǎn)，不僅可檢測(cè)定性，還可以定量檢測(cè)微量、極微量的抗原或抗體。動(dòng)物微生物最適比例與帶現(xiàn)象抗原與抗體結(jié)合，其比例適當(dāng)時(shí)才可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)反應(yīng)。抗體除IgM是5價(jià)，SIgA4價(jià)外，一般抗體都含有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)（二價(jià)）；抗原則根據(jù)分子大小，有10～50個(gè)不等的結(jié)合點(diǎn)。當(dāng)抗原抗體比例適當(dāng)時(shí)，兩者結(jié)合后，尚有未飽和的結(jié)合點(diǎn)，可以繼續(xù)與游離的抗體、抗原或與抗原抗體結(jié)合物的未飽和點(diǎn)相聯(lián)結(jié)，逐漸形成愈來(lái)愈大的復(fù)合物

3、，出現(xiàn)了肉眼可見(jiàn)反應(yīng)。比例最適合，出現(xiàn)反應(yīng)最快，反應(yīng)產(chǎn)物愈多。如果抗原或抗體過(guò)多，抗體和抗原結(jié)合點(diǎn)的聚合一開(kāi)始時(shí)即達(dá)到飽和，形成小的復(fù)合物則不能繼續(xù)與相鄰抗原、抗體結(jié)合，不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)，謂之帶現(xiàn)象。前帶后帶動(dòng)物微生物可逆性抗原與抗體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這種結(jié)合是可逆的，結(jié)合條件為0℃～40℃、pH4～9。如溫度超過(guò)60℃或pH降到3以下，或加入解離劑時(shí)，則抗原抗體復(fù)合物又可重新解離，并且分離后抗原或抗體的性質(zhì)仍不改變。動(dòng)物微生物用已知測(cè)未知所有的血清學(xué)試驗(yàn)都是用已知抗原測(cè)定未知抗體，或用已知

4、抗體測(cè)定未知抗原。動(dòng)物微生物影響血清學(xué)試驗(yàn)的因素電解質(zhì)：血清學(xué)反應(yīng)須在適當(dāng)濃度的電解質(zhì)參與下，才出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。0.9%氯化鈉溶液。8-10%溫度：在一定溫度范圍內(nèi)，溫度越高，抗原、抗體分子運(yùn)動(dòng)速度越快，這可以增加其碰撞的機(jī)會(huì)，加速抗原抗體結(jié)合和反應(yīng)現(xiàn)象的出現(xiàn)。動(dòng)物微生物酸堿度：血清學(xué)反應(yīng)通常用pH6～8，過(guò)酸或過(guò)堿都可使復(fù)合物解離，pH值在等電點(diǎn)時(shí)，可引起非特異凝集。振蕩：適當(dāng)?shù)臋C(jī)械振蕩能增加分子或顆粒間的相互碰撞，加速抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，但強(qiáng)烈的振蕩可使抗原抗體復(fù)合物解離。雜質(zhì)和異物：試驗(yàn)介質(zhì)

5、中如有與反應(yīng)無(wú)關(guān)的雜質(zhì)、異物存在時(shí)，會(huì)抑制反應(yīng)的進(jìn)行或引起非特異性反應(yīng)。動(dòng)物微生物血清學(xué)試驗(yàn)的類(lèi)型凝集試驗(yàn)沉淀試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和試驗(yàn)免疫標(biāo)記技術(shù)動(dòng)物微生物凝集試驗(yàn)的概念細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原，或吸附在紅細(xì)胞、乳膠等顆粒性載體表面的可溶性抗原，與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間，復(fù)合物互相凝聚形成肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)塊，稱(chēng)為凝集試驗(yàn)。動(dòng)物微生物凝集試驗(yàn)的類(lèi)型直接凝集試驗(yàn)間接凝集試驗(yàn)動(dòng)物微生物直接凝集試驗(yàn)概念：顆粒性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)的參與下，直接結(jié)合，凝集成團(tuán)的現(xiàn)象，稱(chēng)直接凝

6、集試驗(yàn)。類(lèi)型：按其操作方法可分為玻片法和試管法。動(dòng)物微生物1．玻片凝集試驗(yàn)方法：在玻璃板或瓷片上進(jìn)行。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速。用途：定性試驗(yàn)，如細(xì)菌鑒定、血型鑒定等。動(dòng)物微生物2．試管凝集試驗(yàn)方法：在試管中進(jìn)行。特點(diǎn)：準(zhǔn)確、耗時(shí)。用途：定量試驗(yàn)，如診斷布氏桿菌病，測(cè)定抗體的凝集價(jià)。結(jié)果判定結(jié)果用“+”表示反應(yīng)強(qiáng)度。++++：液體完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底。+++：液體透明，菌體基本被凝集沉于管底。++：液體不甚透明，管底有明顯的凝集沉淀。+：液體透明度不明顯或不透明，有不明顯的沉淀或有沉淀

7、的痕跡?！阂后w不透明，呈均勻混濁，管底無(wú)凝集。有時(shí)有少量菌體集中于管底中心，呈臍狀，但振搖時(shí)，立即散開(kāi)呈均勻渾濁。以出現(xiàn)“++”的最高血清稀釋倍數(shù)即為該份血清的效價(jià)，又叫凝集價(jià)。大動(dòng)物（馬，牛，駱駝等）以凝集價(jià)1：100以上判為陽(yáng)性，1：50的凝集價(jià)判為可疑。中小動(dòng)物（豬，羊，狗等）以凝集價(jià)1：50以上判為陽(yáng)性，1：25的凝集價(jià)判為可疑。如對(duì)照管不符合要求時(shí)，試管須廢棄重做。動(dòng)物微生物間接凝集試驗(yàn)概念：將可溶性抗原或抗體與載體連接后，再與相應(yīng)的抗體或抗原作用，所出現(xiàn)的特異性凝集反應(yīng)為間接凝集試

8、驗(yàn)。類(lèi)型：間接血凝試驗(yàn)乳膠凝集試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn)動(dòng)物微生物致敏紅細(xì)胞紅細(xì)胞抗原紅細(xì)胞抗原致敏紅細(xì)胞被檢抗體紅細(xì)胞凝集間接血凝試驗(yàn)原理凝集強(qiáng)度判定＋（100%紅細(xì)胞凝集）：邊緣不整齊，有紅色顆粒布滿(mǎn)孔底）±（50%紅細(xì)胞凝集）V型孔：孔底可見(jiàn)紅色顆粒，中央有少量紅細(xì)胞沉淀－紅細(xì)胞呈點(diǎn)狀沉于孔底，無(wú)紅色顆粒。能使雞紅細(xì)胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)，為該病毒的紅細(xì)胞凝集滴度，即一個(gè)凝集單位。如表18-1-1的病毒血凝滴度為27，即將病毒原液作27倍稀釋?zhuān)渲泻粋€(gè)血凝單位的病毒。由于病毒血凝抑制試驗(yàn)中需