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1、歐美楊107莖尖脫毒及組培快繁研究歐美楊107（populus×euramericanacv.“Neva”）是中國林科院張綺文研究員于1984年從意大利引入我國的楊樹新品種,該品種具有樹形美、干形直、尖削度小、樹冠窄小、病蟲危害少、生長迅速等優(yōu)點,已經(jīng)成為了我國北方地區(qū)廣泛栽培的楊樹優(yōu)良品種之一。近年來,由于歐美楊107長期采用無性繁殖方式繁殖苗木,導(dǎo)致許多真菌、細(xì)菌及病毒的出現(xiàn),使得歐美楊107種性慢慢退化,植株抗逆性,速生性明顯降低。為恢復(fù)歐美楊107優(yōu)良種性,并對其品種進行苗木復(fù)壯。本研究便采用歐美楊10
2、7大田莖段、莖尖、葉片、根及其瓶苗莖段、頂芽、瓶苗葉片為實驗材料,進行脫毒實驗及其檢測比較。還采用選育出的2株歐美楊107優(yōu)良單株進行組培擴繁等。以期建立一套操作簡單、快速高效且效果穩(wěn)定完善的脫毒快繁技術(shù)體系,旨在恢復(fù)歐美楊107良種種性,為楊樹良種的長期推廣具有積極的指導(dǎo)意義。主要結(jié)論如下:1、采用帶有頂芽或腋芽的兩株優(yōu)良單株的大田莖段為外植體材料,切取長1cm且每段帶有一個頂芽或腋芽的莖段,接于誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基培養(yǎng),最后得到大量優(yōu)良單株組培苗。2、取經(jīng)組織快繁培養(yǎng)得到的優(yōu)良單株瓶苗莖段進行分化增殖正交實驗,篩
3、選最適宜的分化增殖配方。結(jié)果為1/2MS+6-BA0.45mg·L-1+NAA0.05mg·L-1+GA1.0mg·L-1的培養(yǎng)基分化增殖效果最好,最高增殖數(shù)達(dá)26。3、用優(yōu)良單株繼代增值的不定芽,接種于生根培養(yǎng)基,篩選最適合的生根配方,實驗表明,生根效果最理想的培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.02mg·L-1+IBA0.05mg·L-1,生根率100%,平均生根數(shù)5.9條。4、歐美楊107莖尖脫毒培養(yǎng),
4、成功獲得4個脫毒株系。通過采用（ELISA）檢測技術(shù)對4個株系進行檢測,結(jié)果顯示,莖尖培養(yǎng)得到的4個株系中楊樹煙草脆裂病毒（TRV）完全脫除,被檢測脫毒株系OD值均小于病毒臨界值（CUTOFF）0.2395;而被測4個株系中楊樹花葉病毒（PV-1）未完全脫除,其中一個株系被檢測OD值大于病毒臨界值（CUTOFF）0.2175。5、為更好脫去歐美楊107的病毒,對歐美楊107采用變溫?zé)崽幚斫Y(jié)合莖尖脫毒,熱處理過程中瓶苗生長迅速,同時伴有葉變黃,皺縮、落地現(xiàn)象發(fā)生,瓶苗耐受時間最長為24d,熱處理結(jié)束后被剝離的莖尖
5、生長快,褐化現(xiàn)象明顯減少甚至沒有,保存率比較高。將熱處理培養(yǎng)成的幼苗進行檢測,結(jié)果表明,楊樹煙草脆裂病毒（TRV）和楊樹花葉病毒（PV-1）兩種病毒在被檢測植株體內(nèi)都不存在,被檢測植株OD值均小于兩種病毒臨界值,說明熱處理與莖尖結(jié)合能夠有效同時脫除TRV和PV-1兩種病毒。6、歐美楊107化學(xué)結(jié)合莖尖處理脫毒,檢測結(jié)果說明,當(dāng)添加病毒唑15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1時能夠同時將TRV和PV-1兩種病毒脫除,添加這三種濃度被檢
6、測植株的OD值均小于兩種病毒的臨界值;而低于15mg·L-1時兩種病毒均不能脫出。但在實驗過程中15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1病毒唑處理對試管苗生長均有抑制作用,濃度越高抑制作用越強,15mg·L-1繼代多次后,抑制作用減輕或降為零,瓶苗保存率比較高,而20mg·L-1、25mg·L-1病毒唑有時嚴(yán)重抑制瓶苗的生長,保存率極低,所以15m
7、g·L-1在歐美楊107化學(xué)處理中為首選濃度,脫毒處理效果也比較理想。
