最新實(shí)驗(yàn)7-ACE基因多態(tài)性分析ppt課件.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)7-ACE基因多態(tài)性分析實(shí)驗(yàn)概要實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)操作結(jié)果和分析注意事項(xiàng)思考題一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膹奈⒘縼碓吹慕M織細(xì)胞中抽提基因組DNAPCR法分析基因多態(tài)性分析真核生物基因組中非編碼序列多于編碼序列基因組編碼序列非編碼序列調(diào)控序列重復(fù)序列串聯(lián)重復(fù)序列（串聯(lián)排列：大衛(wèi)星、小衛(wèi)星、微衛(wèi)星）散在重復(fù)序列（散在分布：Alu家族）重復(fù)單位長(zhǎng)度：1-幾千bp；重復(fù)次數(shù)：幾次-幾百萬次Alu家族重復(fù)單位：300bp左右；130+31+130bp具Alu酶切位點(diǎn)30-50萬次功能：基因調(diào)控Alu元件的插入、刪除和重組與許多先天性遺傳疾病和癌癥相關(guān)淋巴細(xì)胞染色體：綠色為Alu序列ACE基因分析的理論

2、基礎(chǔ)ACE基因第16內(nèi)含子存在一段長(zhǎng)度為287bp（Alu序列）的插入/缺失（I/D）多態(tài)性片段，I/D多態(tài)性與血液ACE水平有明確關(guān)系，DD型ACE水平最高，ID次之，II最低。左室肥大患者中DD型頻率明顯增高。實(shí)驗(yàn)原理以DNA為模板，ACE基因特異的引物序列位于287bp插入/缺失片段的兩側(cè)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，故II型擴(kuò)增片段長(zhǎng)度約為490bp，DD型擴(kuò)增片段長(zhǎng)度約為190bp，ID型擴(kuò)增片段為２個(gè)，分別為190bp和490bp。根據(jù)PCR擴(kuò)增片段的大小可進(jìn)行多態(tài)性分析。插入片段插入型（I型）缺失型（D型）490bp190bp三、操作步驟基因組DNA抽提PCR反應(yīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)

3、1.基因組DNA抽提溶液Ⅰ10ml漱口20秒收集漱口水；3000g×5min×RT，棄上清；溶液Ⅱ250μl重懸沉淀；3000g×1min，棄上清；溶液Ⅲ250μl重懸沉淀，振蕩10秒；（變性）轉(zhuǎn)至1.5ml離心管，99℃×5min；加溶液IV50μl振蕩5秒；（中和）3000g×5min，上清轉(zhuǎn)移至新0.5ml離心管，取5ul用于PCR.(4%蔗糖溶液)(NaOH)(Tris-HCl)2.PCR反應(yīng)取消毒的0.2ml離心管，加入下列成分：2×PCRBuffermix10μlDNA模板5μl引物混合物(10μMeach)2μlddH2O3μl總體系20μl擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃變性5m

4、in94℃變性30s55℃復(fù)性30s72℃延伸40s72℃延伸10min,4℃保存35個(gè)循環(huán)3.瓊脂糖電泳檢測(cè)制備1.5％瓊脂糖凝膠點(diǎn)樣，電泳紫外燈下觀察結(jié)果四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：ACE基因多態(tài)性電泳圖2k1k750bp500bp250bp100bp五、注意事項(xiàng)1.清潔口腔，充分漱口。2.裂解細(xì)胞后震蕩時(shí)間不易長(zhǎng)，以免DNA斷裂。六、思考題1.何為基因多態(tài)性？2.基因多態(tài)性的臨床意義有哪些？基建投資控制交流1投資控制的概念投資控制管理的原則2投資控制策略31、投資控制的概念項(xiàng)目投資是指進(jìn)行項(xiàng)目工程建設(shè)花費(fèi)的全部投資，由設(shè)備購置費(fèi)、建筑工程費(fèi)、安裝工程費(fèi)和其它費(fèi)用組成。包括靜態(tài)投資和動(dòng)態(tài)投資

5、。項(xiàng)目投資控制是在項(xiàng)目的決策階段、設(shè)計(jì)階段、建設(shè)階段，采取一定的方法和措施將工程投資控制在合理的范圍內(nèi)，隨時(shí)糾正發(fā)生的偏差，以保證項(xiàng)目投資控制目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)。投資控制應(yīng)貫穿工程建設(shè)全過程：投資決策階段設(shè)計(jì)階段采購階段建設(shè)實(shí)施階段結(jié)算階段1、投資控制的概念基本建設(shè)期間的投資控制重點(diǎn)在技術(shù)方案上制止浪費(fèi)在采購上控制價(jià)格嚴(yán)控管理費(fèi)用成本投資控制的宗旨以提高企業(yè)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力機(jī)組整個(gè)壽命期內(nèi)的效益最大21投資控制的概念投資控制管理的原則投資控制策略3一標(biāo)準(zhǔn)、兩環(huán)節(jié)、三制2、投資控制管理原則一標(biāo)準(zhǔn)：建“盈利型企業(yè)”作為投資控制的標(biāo)準(zhǔn)以項(xiàng)目所在地標(biāo)桿電價(jià)和公司規(guī)定的資本金回報(bào)率反算的投資額，該投資作為

6、投資估算和初設(shè)概算的上限。以行業(yè)基準(zhǔn)收益率和投資回收期評(píng)估項(xiàng)目的經(jīng)濟(jì)性和投產(chǎn)后市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)條件，確保建設(shè)盈利企業(yè)兩環(huán)節(jié)：設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)和市場(chǎng)環(huán)節(jié)設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)：①設(shè)計(jì)技術(shù)管理②施工組織設(shè)計(jì)管理市場(chǎng)環(huán)節(jié)：①產(chǎn)品的市場(chǎng)環(huán)節(jié)②采購的市場(chǎng)環(huán)節(jié)三制：工程費(fèi)用－－招標(biāo)制管理費(fèi)用－－預(yù)算制結(jié)算費(fèi)用－－審計(jì)制2、投資控制管理原則投資控制責(zé)任分工工程部：重點(diǎn)抓好設(shè)計(jì)優(yōu)化，管控設(shè)計(jì)變更、零星工程委托和工程量簽證；計(jì)劃部：嚴(yán)控施工及服務(wù)類項(xiàng)目采購關(guān)和合同結(jié)算關(guān)；物資部：嚴(yán)控設(shè)備及材料類采購關(guān)，確保設(shè)備到貨滿足工程建設(shè)需求；財(cái)務(wù)部：利用多種融資渠道和手段降低建貸利息，利用相關(guān)政策爭(zhēng)取稅收優(yōu)惠；辦公室和全體部門：控制四項(xiàng)管

7、理費(fèi)用。投資控制不是一件單一或例外的工作，更不是一句口號(hào)。要求全體人員具有投資控制的意識(shí)，并將其落實(shí)到具體日常工作中，時(shí)時(shí)處處或點(diǎn)點(diǎn)滴滴，從而達(dá)到全員投資控制的狀態(tài)。投資控制的概念1投資控制管理的原則2投資控制策略3結(jié)算階段控制重點(diǎn)3.4設(shè)計(jì)階段控制重點(diǎn)3.1施工階段控制重點(diǎn)3.3采購階段控制重點(diǎn)3.2其他3.5通過可研評(píng)審、初設(shè)評(píng)審、司令圖評(píng)審及各專題評(píng)審環(huán)節(jié)，充分借鑒外部專業(yè)技術(shù)力量，進(jìn)行設(shè)計(jì)優(yōu)化工作，從設(shè)計(jì)源頭控制工程投資；按照“簡(jiǎn)約實(shí)用、控制冗余”的原則進(jìn)行設(shè)