半夏蛋白的提取分離、含量測(cè)定及對(duì)hela細(xì)胞的作用研究

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1、本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對(duì)所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：曰期：年月曰國(guó)

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3、關(guān)?

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6、Y2051745保密，在學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)浙江理工大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)

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8、辟月日學(xué)位論文作者簽名:碎it日期3月IAfQ不保密理4義凌碩士學(xué)位論文半夏蛋白的提取分離、含量測(cè)定及對(duì)Hela細(xì)胞的作用研究作者姓名馮瑞娟學(xué)科(專業(yè)）生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)老師檢濤副教授所在學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院提交日期年中國(guó)杭州浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文ZHEJIANGSCI-TECHUNIVERSITYMASTERDISSERTATIONExtraction,Isolation

9、,AssayingofPinellinandItsEffectonHelaCellRuiJuanFengDirectedbyDr.TaoXu,viceprofessorCollegeofLifeSciences,ZhejiangSci-TechUniversityMar.,2012HANGZHOU,CHINA分^^號(hào)：密級(jí):UDCf半夏蛋白的提取分離、含量測(cè)定及對(duì)Hda細(xì)胞的作用研究浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文論文答辯日期答辯委員會(huì)主席jcj4-川論文評(píng)閱人；答辯委員會(huì)成員後傳浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文課題來(lái)源國(guó)家自然科學(xué)基金(30772712)浙

10、江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文搞要半夏(?/?^///a/mia,a(Thunb.)Breit.)為天南星科半夏屬植物，是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材，具有燥濕化疲，降逆止嘔，消痛散結(jié)的功效。主要活性成分有留醇、生物堿、活性多糖、氧基酸、有機(jī)酸和凝集素等。其中，半夏凝集素是半夏總蛋白的主要成分之一*近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，半夏蛋白具有多種生物活性，是半夏抗蟲、抗腫瘤及抗生育的主要有效成分，成為半夏研究的熱點(diǎn)。本文的研究?jī)?nèi)容是半夏總蛋白及半夏凝集素，主要包括半夏總蛋白的動(dòng)態(tài)變化及半夏凝集素對(duì)Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)的影響。本研究采用4種常用的總蛋白質(zhì)提取方法(丙翻沉淀法、95

11、%(NH4)2S04鹽析法、TCA-丙嗣法和Tris-飽和臉法)，同等條件下分別提取半夏總蛋白質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行十二煉基硫酸納-聚丙煉酸胺凝膠(SDS-PAGE)電泳，電泳結(jié)果顯示：四種方法提取的總蛋白電泳行為無(wú)明鼠差導(dǎo)。采用Bradford浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文蛋白含量測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白含量，四種方法提取的總蛋白含量結(jié)果為：TCA-丙銅法(1.082mg/ml)>95%(NH4)2S04鹽析法(0.678mg/ml)>Tris-飽和粉法(0.493丙飼法(0.369mg/ml),比較分析發(fā)現(xiàn)TCA-丙雨法提取半夏總蛋白效果最佳。利用TCA-丙

12、爾法分別提取半夏不同生長(zhǎng)時(shí)期(出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰范期及倒苗期)采集到的樣品總蛋白質(zhì),SDS-PAGE電泳檢測(cè)及Bradford蛋白含量測(cè)定試劑盒測(cè)定半夏不同生長(zhǎng)時(shí)期總蛋白質(zhì)含量。其中，不同時(shí)期采集到的樣品分為新鮮和千燥處理兩組。SDS-PAGE電泳結(jié)果比較分析發(fā)現(xiàn)：新鮮組樣品中，不同生長(zhǎng)時(shí)期的總蛋白成分有差異；新鮮組樣品多千燥處理組樣品10條蛋白帶，且干燥處理組樣品中出現(xiàn)了新鮮組樣品中沒有的蛋白條帶(如表觀分子量為26kDa和35kDa的蛋白),而表觀分子量為12kDa和24kDa的蛋白成分在兩個(gè)處理及各個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期中占的比例均較大。

13、含量測(cè)定結(jié)果為：新鮮半夏不同生長(zhǎng)時(shí)期中，塊蓮中總蛋白含量變化表現(xiàn)為倒苗期>佛焰茍；期>出芽期>珠芽期>全苗期；不同生長(zhǎng)時(shí)期干燥處理半夏中，塊基中總蛋白含量變化表現(xiàn)為倒苗期>珠芽期>出芽期>佛焰箱期>全苗期。含量測(cè)定結(jié)果顯示倒苗期總蛋白含量最高，全苗期總蛋白含量最低。結(jié)果表明，半夏不同生長(zhǎng)時(shí)期總蛋白成分發(fā)生了一定變化，同一蛋白成分在不同的生長(zhǎng)時(shí)期含量有差異，新鮮和干燥處理樣品中蛋白含量和種類也有一定差異。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)半夏凝集素的甘露糖專一結(jié)合的性質(zhì)，設(shè)計(jì)制備了甘露糖-Sepharose4B凝膠，從半夏總蛋白中成功分離純化出一種半夏凝集素，

14、SDS-PAGE凝膠電泳檢測(cè)，表觀分子量為12kDa,純度達(dá)到電泳純，研究表明該凝集素是一種糖蛋白，能凝集小鼠紅細(xì)胞。用不同濃度(0.004mg/mL、0.02mg