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《碩士論文-含有antiwaxy基因表達(dá)載體的構(gòu)建及水稻遺傳轉(zhuǎn)化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、致謝首先感謝導(dǎo)師李建粵副教授在研究生三年中給我的悉心幫助!本論文是在導(dǎo)師李建粵副教授的悉心指導(dǎo)下完成的。論文從選題到制定具體的試驗方案，從實施到撰寫，每一步都凝結(jié)著李老師的心血。感謝李老師三年來在學(xué)業(yè)上的悉心指導(dǎo)!李老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、兢兢業(yè)業(yè)的工作作風(fēng)和對科學(xué)孜孜不倦的鉆研精神，將使我銘記和受益終生，是我畢生所學(xué)習(xí)的目標(biāo)。不僅如此，李建粵老師在生活上還給予了我最悉心的照料，謹(jǐn)此致以虔誠的敬意和衷，心的感謝!衷心感謝中科院植物生理研究所與生態(tài)研究所洪孟民研究員和王宗陽研究員為我們提供的質(zhì)粒，感謝上海閔行區(qū)農(nóng)科所陸文龍高級農(nóng)藝師為我們提供試
2、驗的水稻材料，感謝遺傳學(xué)碩士點周根余教授和楊仲南教授在學(xué)習(xí)和生活上的關(guān)懷以及在論文實驗上給予的支持和幫助!感謝實驗室所有的同學(xué)，張偉、劉麗娜、魏秀麗、李海泉、逯慧、尹中明、顧婷玉、石少華、周永國、沈忠偉，他們都在實驗上給了我無私的幫助!感謝2002級本科生戎益泉、張善明、魏振、陳文杰同學(xué)在論文和試驗中給予的幫助!感謝好友錢志萍、龐婉婷、楊云云在生活上給予我的關(guān)心和幫助，也給了我很多快樂!最后，感謝我的家人對我三年研究生學(xué)習(xí)生涯的支持，他們的理解、鼓勵，關(guān)懷與寬容是我不斷前進(jìn)的動力!再次衷心的感謝所有關(guān)心和幫助過我的老師、同學(xué)和朋友們!含有
3、礎(chǔ)一嬲哮基因表速栽體構(gòu)建反水稻遺傳轉(zhuǎn)化摘要在大量轉(zhuǎn)基因植物被推向市場的同時，人們對轉(zhuǎn)基因植物可能存在的風(fēng)險感到擔(dān)擾。在轉(zhuǎn)基因作物中，不含標(biāo)記基因和外源啟動子將提高轉(zhuǎn)基因作物的食用安全性和對環(huán)境的安全性，更易被廣大消費者所接受，也有利于對同一個植物品種進(jìn)行多次轉(zhuǎn)基因操作。本研究在p13w8載體的基礎(chǔ)上重新構(gòu)建了含有反義蠟質(zhì)基因，且去除了抗性標(biāo)記基因(潮霉素基因)和35s啟動子的安全性表達(dá)載體p13AwY_1，這可為日后利用基因工程的共轉(zhuǎn)化法培育優(yōu)質(zhì)食味品質(zhì)安全轉(zhuǎn)基因水稻奠定基礎(chǔ)，更有利于消費者食用安全和生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展。本研究還利用根癌
4、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的共轉(zhuǎn)化法，將含有pcAMBIAl301雙元載體(含有潮霉素抗性基因、穢s報告基因)和己成功構(gòu)建的p13AWVl雙元載體(只含反義蠟質(zhì)基因不含抗性標(biāo)記基因和譬淞報告基因)的根癌農(nóng)桿菌以1：9的比例混合導(dǎo)入由粳型光敏核不育系水稻261S成熟胚誘導(dǎo)形成的愈傷組織中，經(jīng)抗性篩選獲得41棵轉(zhuǎn)基因植株。轉(zhuǎn)基因To代植株經(jīng)PCR檢測，有10棵為共轉(zhuǎn)化植株，共轉(zhuǎn)化率為24．39％。southemblot雜交分析證實，p13AwY_l雙元載體T．DNA已整合進(jìn)入轉(zhuǎn)基因植株基因組中。利用pc觸佃．IAl301雙元載體上的gw報告基因從Tt代種子中
5、淘汰具有報告基因及抗性標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因后代，這為篩選只含目的基因、無抗性選擇標(biāo)記基因和報告基因的轉(zhuǎn)基因后代奠定基礎(chǔ)。當(dāng)今世界上正興起一種新型稻米——軟米育種。軟米最大特點是：稻米的直鏈淀粉含量較低，一般小于10％，其米質(zhì)介于粘性與糯性之間，口感極佳。目前已有報道表明，導(dǎo)入蠟質(zhì)基因(腑噦)的反義片段能夠有效降低稻米的直鏈淀粉含量，但其轉(zhuǎn)基因后代中直鏈淀粉含量小于10％或明顯降低的后代都比較少。因此，本研究又在安全性表達(dá)載體p13Awvl的基礎(chǔ)上構(gòu)建含有雙份反義蠟質(zhì)基因的安全性表達(dá)載體p13AWV2，即把雙份反義蠟質(zhì)基因片段構(gòu)建在一個1’-D
6、NA區(qū)段上。該表達(dá)載體的成功構(gòu)建可為培育直鏈淀粉含量明顯降低的特種水稻奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因作物安全性反義蠟質(zhì)基因表達(dá)載體構(gòu)建無標(biāo)記基因共轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)35S啟動子軟米食味品質(zhì)改良搐要AbstractWithlargeamountoftrallsgenicplamsbeingcommercialized，peoplefeeluneasyaboutthepotemialrisksoftranSgenicplantsMarker-行eeandacceptorpromotermayraisefoodandenvimnmembiosafet
7、yofGeneticallyM0dmedCrops．Thus，consumercanreceivethemmoreeasilyReconstmctionOfp13AWY二1isbasedonp13W8．p13AWY-lcamesanti-腑叫g(shù)enebutwithoutresistancemarkergene(hygromycin)and35Spromotefnwilllayt11efoundatiOnforriceeatingqualityimproVemembytransgenictechnologyMoreoveL“canmaket
8、hegeneticallymodifiedplamssaf．erforconsumersandtheenvironmem．Thetwol(indsof彳g陽6鯽ff鯽zf踟咖抬鵂whichre
