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1、流式細(xì)胞術(shù)在白血病診斷中的應(yīng)用一簡介FCM：集激光、電子、光電測量、計(jì)算機(jī)、熒光化學(xué)、單抗的高科技儀器。對處在快速直線流動狀態(tài)中的單個(gè)細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)的、定量分析和分選的技術(shù)。分兩類：臺式機(jī)（臨床型）大型機(jī)（cellsorting).科研用。BDFACSVantageSEFCM的結(jié)構(gòu)FCM的結(jié)構(gòu)細(xì)胞流動室；光源；聚光系統(tǒng)；信號檢測器；電子計(jì)算機(jī)；細(xì)胞分選裝置。光源細(xì)胞流動室聚光系統(tǒng)信號監(jiān)測器數(shù)據(jù)的存儲、顯示與分析數(shù)據(jù)的存儲：listmode顯示：單參數(shù)直方圖(histgram);：常用于分析DNA等；雙參數(shù)：二維點(diǎn)圖等（dotplot)；等高圖：(contour)
2、三維等高圖：3Dplot設(shè)門（gating):DataAcquisition-Listmode一定條件下，熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)DNA含量成正比。只反應(yīng)一個(gè)參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量間的關(guān)系，不能顯示兩個(gè)獨(dú)立參數(shù)與細(xì)胞的關(guān)系。ImmunofluorescenceFlowCytometrycont.DatadisplayedGreenFluorescenceIntensityNumberofCellsUnstainedcellsFITC-labeledcellsOneParameterHistogramRedFluorescenceIntensityGreenFluorescenceInte
3、nsityTwoParameterHistogramContourplot3Dplot:細(xì)胞多的地方，山峰高。FCM檢測常用參數(shù) 內(nèi)部參數(shù)—散射光測定前向角散射(forwardscatterFSC):與激光束平行的信號。與被測細(xì)胞大小有關(guān)。側(cè)向角散射（sidescatterSSC):與激光束呈90°的光信號。與細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)和顆粒物質(zhì)多少有關(guān)。采用FSC、SSC組合，可區(qū)分淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞等群體。FCM常用參數(shù) 外部參數(shù)—熒光測量熒光素探針標(biāo)記的細(xì)胞所發(fā)熒光。熒光信號強(qiáng)弱、多少與細(xì)胞的抗原量、內(nèi)含物多少有關(guān)。常用的熒光顯色劑：FITC：PE：藻紅蛋白PerCP；PI
4、：碘化丙啶，測定DNA含量。臨床常用三色熒光檢測，現(xiàn)有四色分析。CD45vsSSC設(shè)門CD45為造血細(xì)胞（紅系除外）的共同抗原。避免雜質(zhì)細(xì)胞的沾染。CD45:淋巴細(xì)胞>單核細(xì)胞>成熟粒細(xì)胞>原幼細(xì)胞在FCM分析時(shí)特別注意：細(xì)胞的分化成熟、細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及其分化抗原的逐漸增減是漸進(jìn)過程，非突變。故同時(shí)獲知一個(gè)細(xì)胞的多種參數(shù)方能正確判斷細(xì)胞屬性。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生克隆增殖后，可出現(xiàn)抗原量變、丟失和錯(cuò)譯表達(dá)。細(xì)胞抗原的陽性率及熒光強(qiáng)度是同等重要的指標(biāo)。FCM可采用的標(biāo)本單個(gè)細(xì)胞，新鮮標(biāo)本，抗凝保存：PB；BM；（有時(shí)BM活檢標(biāo)本）LN（包括FNA）；CSF；組織浸潤FNA或活檢標(biāo)本；急性
5、白血病FCM分析白血病細(xì)胞的抗原表達(dá)一定程度遵循正常細(xì)胞抗原表達(dá)的規(guī)律。白血病細(xì)胞為腫瘤性生長，可出現(xiàn)正常細(xì)胞表達(dá)以外的異常現(xiàn)象，如缺失、錯(cuò)譯表達(dá)等。目前未發(fā)現(xiàn)白血病特異性抗原，須多參數(shù)分析。臨床原/幼細(xì)胞群定性比定量更為重要?？贵w的選擇：常用抗體選擇：核心McAbs:確定淋系或髓系（系特異性）髓系：CD33、CD13、CD14，cMPOB-cell:CD19、CD10、cCD22CD20T-cell:CD7、CD2、CD5、cCD3紅系：GlyA巨核細(xì)胞：CD41、CD61非系列特異性：CD34、DR、CD45ALpanelCD7/CD117/CD45---protoc
6、alHLA-DR/CD13/CD45CD14/CD2/CD45CD19/CD5/CD45CD33/CD34/CD45CD20/CD10/CD45CD64,117,13,33,14,64—myeloid19,10,20—Blineage7,2,5—TlineageDR,34immatureAML常見CD表達(dá)FABSubtypeCommonPhenotypeComments/VariationsM0DR.CD13,CD33,CD34,CD7,cMPO*GenerallynegativeforlymphoidmarkersM1SimilartoM0exceptCD15M2DR,
7、CD13,CD33,moreCD15,lessCD34CD19(+)--t(8;21)favorableprognosisM3DR(-)*,CD13,CD15,CD33,CD34-/+,CD2(+),DR(-)inmaturingAML,considerM3.Myeloid/naturalkillercellALCD56(+).M4/M5DR,CD15,CD14,CD33,CD13,CD4weakCD2(+),considerM4EoM6DR,CD13-/+,CD33+/-,CD34,CD45weakMatureformsex
