平板菌落的辨別計(jì)數(shù)和細(xì)菌染色

《平板菌落的辨別計(jì)數(shù)和細(xì)菌染色》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、環(huán)工綜合實(shí)驗(yàn)平板菌落的辨別計(jì)數(shù)和細(xì)菌染色實(shí)驗(yàn)報(bào)告環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心實(shí)驗(yàn)題目平板菌落的辨別計(jì)數(shù)和細(xì)菌染色實(shí)驗(yàn)類別綜合實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)時(shí)間實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度:濕度:同組人數(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法 2.掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)； 3.了解簡(jiǎn)單染色法的原理，并掌握其操作方法。 4.學(xué)習(xí)并掌握微生物涂片、革蘭氏染色的基本技術(shù)和無菌操作技術(shù) 二、實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備活材料：培養(yǎng)的菌落 染色液和試劑：結(jié)晶紫、碘液、95%酒精、沙黃、蒸餾水 器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、煤氣燈、擦鏡紙、顯微鏡三、實(shí)

2、驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理問答題：1.如何對(duì)微生物菌落進(jìn)行鑒別？答：細(xì)菌：濕潤(rùn)，粘稠，易挑起，一般形成較小的圓形菌落，顏色有白色、黃色等，表面光滑或不光滑放線菌：干燥，多皺，難挑起，菌落較小，多有色素，菌落背面有同心圓形紋路。這點(diǎn)可以和細(xì)菌菌落區(qū)分。酵母菌：濕潤(rùn)，粘稠，易挑起，表面光華，比細(xì)菌的菌落大而厚，菌落為淡黃色，光滑，半透明，比細(xì)菌菌落大。霉菌：菌絲細(xì)長(zhǎng)，菌落疏松，成絨毛狀、蜘蛛網(wǎng)狀、棉絮狀，菌落大型，肉眼可見許多毛狀物，棕色、青色等，可見黑色的分生孢子群。2.如何通過對(duì)平板微生物菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)知道湖水、自來水和空氣中細(xì)菌的數(shù)量？答：選擇平均菌落數(shù)在

3、30～300間的平板⑴若只有一個(gè)稀釋度符合，以該稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告⑵若有兩個(gè)稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數(shù)除以低稀釋度的菌落數(shù)的值）：若0.5≤比值≤2，以兩稀釋度的菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)所得的值的均值報(bào)告；若2≤比值或比值≤0.5，則取其中較少的菌落總數(shù)進(jìn)行報(bào)告。⑶所有菌落數(shù)均不在30～300間以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù):若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均大于300，則按稀釋倍數(shù)最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告;若所有稀釋度的菌落平均數(shù)均小于30，則按稀釋倍數(shù)最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。空氣中細(xì)菌含量的測(cè)

4、定:X=100×100×N／(πr2)X—每m3空氣中的細(xì)菌數(shù)；N：平板暴露5min，置37℃培養(yǎng)24h后生長(zhǎng)的菌落數(shù)；r：平皿底半徑（cm）3.微生物的染色機(jī)理是什么？（單染和革蘭氏染色）答：⑴簡(jiǎn)單染色法：所謂單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形態(tài)的觀察。在中性、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，所以常用堿性染料進(jìn)行染色。堿性染料并不是堿，和其他染料一樣是一種鹽，電離時(shí)染料離子帶正電，易與帶負(fù)電荷的細(xì)菌結(jié)合而使細(xì)菌著色。例如，美藍(lán)（亞甲藍(lán)）實(shí)際上是氯化亞甲藍(lán)鹽，它可被電離成正、負(fù)離子：帶正電荷

5、的染料離子可使細(xì)菌細(xì)胞染成藍(lán)色。常用的堿性染料除美藍(lán)外，還有結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅、番紅（又稱沙黃）等。細(xì)菌體積小，較透明，如未經(jīng)染色常不易識(shí)別，而經(jīng)著色后，與背景形成鮮明的對(duì)比，使易于在顯微鏡下進(jìn)行觀察。⑵革蘭氏染色法：是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G—）兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。該染色法所以能將細(xì)菌分為G+菌和G—菌，是由這兩類菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和成分的不同所決定的。G—菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇脫色時(shí)

6、溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)復(fù)紅復(fù)染后就成紅色。G+菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的顏色。革蘭氏染色需用四種不同的溶液：堿性染料（初染液）；媒染劑；脫色劑和復(fù)染液。堿性染料初染液的作用象在細(xì)菌的單染色法基本原理中所述的那樣，而用于革蘭氏染色的初染液一般是結(jié)晶紫。媒染劑的作用是增加染料和細(xì)胞之間的親和性或附著力，即以某種方式幫助染料固定在細(xì)胞上，使不易脫落，碘是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細(xì)

7、胞進(jìn)行脫色，不同類型的細(xì)胞脫色反應(yīng)不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95％的酒精。復(fù)染液也是一種堿性染料，其顏色不同于初染液，復(fù)染的目的是使被脫色的細(xì)胞染上不同于初染液的顏色，而未被脫色的細(xì)胞仍然保持初染的顏色，從而將細(xì)胞區(qū)分成G+和G-兩大類群，常用的復(fù)染液是沙黃。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.對(duì)培養(yǎng)的平板菌落（湖水、自來水、空氣）進(jìn)行計(jì)數(shù)并辨別菌落形態(tài)。 2.革蘭氏染色： （1）涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片中央加一滴蒸餾水，按無菌操作法挑取菌落，調(diào)勻并涂成薄膜，涂片必須均勻。 （2）晾干：讓涂片自然晾干或者在酒精燈火焰上方文火烘干。 （3）固

8、定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜），使細(xì)胞質(zhì)凝固，以固定細(xì)菌的形態(tài)，并使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細(xì)菌形態(tài)將毀