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1、水貂阿留申病毒、腸炎病毒與犬瘟熱病毒多重PCR檢測方法的建立與應(yīng)用馬芹王元智閏文卓趙麗麗陳洪巖陸濤峰物與比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室目的水貂阿留中病、病毒性腸炎與犬瘟熱并稱影響水貂健康的三大疫病，擬建立一種可同時檢測三種病毒的多重PCR檢測方法。方法針對三種病毒基因保守區(qū)分別設(shè)計了3對特異性引物，對貂阿留申病毒（ADV）和水貂腸炎病毒（MEV）的DNA模板和犬瘟熱病毒（CDV）的RNA模板進(jìn)行丫多重PCR擴(kuò)增和擴(kuò)增條件優(yōu)化。結(jié)果PCR可同時擴(kuò)增出601bp（ADV）、205bp（MEV）和451bp（CDV）的特異性目的條帶，敏感性試驗(yàn)表明最低核酸檢出量為ADV每微升2.67X10
2、4拷貝、1EV每微升3.02X101拷貝和CDV每微升1.72X105拷貝。臨床樣品檢測結(jié)果表明多重PCR和單一PCR檢測結(jié)果-致。結(jié)論建立的多重PCR檢測方法可快速地檢測ADV、MEV和CDV單一或混合感染的臨床樣品。關(guān)鍵詞：多重PCR;水貂阿留中病毒;水貂腸炎病毐;犬瘟熱病毒;基金：國家支撐計劃項(xiàng)目（2015BA107B02）EstablishmentandapplicationofamultiplexPCRassayfordetectionofAleutiandiseaseparvovirus,enteritisparvovirusandcaninedistemp
3、ervirusintheminkMAQinWANGYuan-zhiYANWen-zhuoZHAOLi-liCHENHong-yanLUTao-fengHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，HeilongjiangProvincialKeyLaboratoryofLaboratoryAnimalandComprativeMedicine;Abstract：ObjectiveAleutiandisease,minkenteritisandcaninedistemperare
4、thethreemajordiseasesaffectinghealthofmink.ThisstudyintendstoestablishamultiplexPCRassayforsimultaneouslydetectingofthesethreeviruses.MethodsAccordingtotheconservativesequencesreportedinGenBank,threepairsofspecificprimersweredesignedtoamplifytheDNAtemplatesofAleutianminkdiseaseparvovirus(
5、ADV)，minkenteritisparvovirus(MEV)，andRNAtemplatesofcaninedistempervirus(CDV),andoptimizedtheamplifyingconditions.ResultsThespecificobjectivestripsof601bp(ADV)，205bp(MEV)and451bp(CDV)wereamplifiedsimultaneously.Thesensitivitytestshowedthatthelowestnucleicaciddetectionlimitswere2.67X101copi
6、esperpLforADV,3.02X101copiesperPLforMEV,and1.72X10)copiesperPLforCDV.TheresultsoftestoftheclinicalsamplesshowedthatthemultiplePCRandsinglePCRassaywereconsistent.ConclusionsTheestablishedmultiplexPCRassayinthisstudycanbeusedtorapidlydetecttheclinicalsamplesofADV,MEVandCDVsingleormixedinfec
7、tions.Keyword：MultiplexPCR;Aleutianminkdiseaseparvovirus;Minkenteritisparvovirus;Caninedistempervirus;貂作為重要的經(jīng)濟(jì)動物，不僅僅具有經(jīng)濟(jì)價值U1，同時貂還是流感病毒、SARS、新城疫病毒、貂圓環(huán)病毒、阿留申病毒以及腸炎病毒的宿主，其中雪貂對流感病毒十分易感，感染后表現(xiàn)出與人相似的癥狀，還能產(chǎn)生免疫反應(yīng)，因此雪貂可作為研究流感病毒最佳的實(shí)驗(yàn)動物模型。貂的實(shí)驗(yàn)動物化養(yǎng)殖必須保證背景淸晰,并對其攜帶的病原體進(jìn)行控制，所以需要建立一
