參貞合劑對s180荷瘤小鼠t細胞免疫功能的影響

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1、參貞合劑對S180荷瘤小鼠T細胞免疫功能的影響【關(guān)鍵詞】參貞合劑；荷瘤小鼠；免疫調(diào)節(jié)　　參貞合劑由中藥人參、黃芪、女貞子三味中藥組成，研究表明人參、黃芪與女貞子均可提高機體的免疫功能，并具有抗腫瘤作用〔1，2〕。為探討上述3種藥合用對荷瘤小鼠免疫功能的影響，筆者觀察了參貞合劑對荷瘤小鼠T淋巴細胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用，為進一步開發(fā)利用參貞合劑提供實驗基礎(chǔ)，也為中藥治療腫瘤的臨床應(yīng)用提供新的思路。　　1材料與方法　　1.1材料　　刀豆蛋白A（ConA,Sigma公司)、IMDM培養(yǎng)基(GiBco公司)、標準胎牛血清（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院灝洋生物)、淋巴細胞分離液(上海恒信化學(xué)試劑有限

2、公司)、噻唑藍(MTT，AMRESCO公司)、ELISA試劑盒（R＆D公司）、單克隆抗體CD3,CD4，CD8試劑盒(華美生物公司)。參貞合劑由本實驗室配制。實驗動物為昆明種雄性小鼠，體重18～20g，購自長春高新醫(yī)學(xué)動物實驗研究中心?！　?.2方法　　小鼠隨機分成2組，每組10只。腹腔接種S180瘤細胞，于接種同時參貞合劑組以參貞合劑胃飼（按53g/kg），生理鹽水組胃飼等量生理鹽水。連續(xù)胃飼10d后取材?！　?.2.1T淋巴細胞亞群的測定　　流式細胞術(shù)檢測荷瘤鼠脾臟CD3+T、CD4+T、CD8+T細數(shù)量、CD4/CD8比值，將小鼠頸椎脫臼處死,常規(guī)制備脾細胞懸液；T

3、risNH4Cl溶脹紅細胞，計數(shù)，取106個細胞(200μl體積)，加入熒光標記CD3、CD4、CD8抗體，避光冰浴45min，冷PBS洗滌2次后，用流式細胞儀檢測脾臟CD3+T、CD4+T、CD8+T細胞數(shù)量?！　?.2.2T淋巴細胞增殖能力的測定　　依文獻〔3，4〕方法：服用參貞合劑組小鼠于停藥后次日，與生理鹽水對照組小鼠同時眼球放血處死，無菌取脾臟，制備脾臟細胞懸液，以完全IMDM培養(yǎng)液稀釋。鏡下計數(shù)脾細胞，調(diào)脾細胞濃度至5×106/ml。取0.1%臺盼藍溶液1滴加4滴細胞懸液，觀察活細胞數(shù)>95％。將不同組別的脾細胞懸液置于96孔培養(yǎng)板中100μg/孔，加

4、入ConA100μg/孔，終濃度為5μg/ml。置CO2培養(yǎng)箱孵育48h，取出用倒置顯微鏡觀察其細胞增殖情況。見有轉(zhuǎn)化的大淋巴母細胞，即脾淋巴細胞已進入對數(shù)分裂期。每孔加入5mg/mlMTT10μl/孔，置CO2培養(yǎng)箱孵育6h后取出，貼壁吸上清液100μl棄之，加入DMSO100μl/孔，充分振蕩后，靜止10min，酶標儀測定（570nm）。　　1.2.3IL2分泌能力檢測　　無菌取脾細胞懸液，采用ELISA方法檢測脾細胞上清IL2含量，具體方法參照說明書進行?！　?討論目前臨床應(yīng)用的抗腫瘤化學(xué)合成藥物雖然抗癌作用確切,療效顯著,但不良反應(yīng)大,長期應(yīng)用易產(chǎn)生耐藥性。中

5、醫(yī)藥治療腫瘤已成為腫瘤治療的主要療法之一，并漸顯其優(yōu)越性。特別是一些中藥的抑瘤作用和作為生物調(diào)節(jié)劑激活機體免疫細胞殺傷腫瘤作用的報道屢見不鮮，但其在抗腫瘤機制方面的研究還有待進一步探討。女貞子是木樨科植物女貞的干燥成熟果實,性味甘、微苦、涼,歸肝、腎經(jīng),具有滋補肝腎、明目烏發(fā)等功能，有報道女貞子有養(yǎng)心安神之功，女貞子多糖對機體的造血系統(tǒng)與免疫功能有調(diào)節(jié)作用〔5〕，女貞子提取物對腫瘤細胞有一定的抑制作用〔6〕。人參具有大補元、益精生血之功效，對免疫功能亦有增強作用〔7，8〕，黃芪有補氣升陽作用〔9〕。本研究結(jié)果證明，參貞合劑對荷瘤小鼠T細胞增殖能力和IL2產(chǎn)生量有上調(diào)作用

6、。機體免疫功能失常是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素，提高腫瘤病人的免疫機能是腫瘤免疫治療的重要方面，本研究為黃芪、女貞子、人參合用提高腫瘤患者免疫功能提供了實驗依據(jù)，提示該藥物組合具有良好的應(yīng)用前景?！緟⒖嘉墨I】　　1張鵬霞,趙蕾,王昭,等.女貞子血清藥理對HeLa細胞凋亡的影響〔J〕.腫瘤，2006；26(16)：11367.　　2劉桂蓮,張承玉,劉曉霓,等.黃芪多糖對人胃癌SGC7901細胞增殖抑制作用的體外研究〔J〕.中國實用醫(yī)藥雜志，2007；2(13):89.　　3王濟,顧立剛,王國慶.肝郁脾虛因素對S180荷瘤小鼠腫瘤生長和T細胞免疫功能的影響〔J〕.北京中醫(yī)藥

7、大學(xué)學(xué)報,2003;26(5):4548.　　4周道洪.測定淋巴細胞轉(zhuǎn)化和IL2活性的新方法——MTT比色分析法〔J〕.中國免疫學(xué)雜志,1986;2(1):39.　　5阮紅,呂志良.女貞子多糖免疫調(diào)節(jié)作用研究〔J〕.中國中藥雜志，1999;24(11):69.　　6顧振綸,梁中琴,等.女貞子提取物對小鼠抗腫瘤作用〔J〕.抗感染藥學(xué),2001;3:51.　　7羅晶,郭焱,顧紅纓,等.人參養(yǎng)榮湯對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2002;12(5):278.　　8張麗輝,劉旭濤,陳積棟,等.復(fù)方人參多糖對老年晚期