吡咯烷二硫代氨基甲酸酯對2型糖尿病大鼠肝臟的保護(hù)作用

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1、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯對2型糖尿病大鼠肝臟的保護(hù)作用：張利眾趙瑞景3劉建坤高書濤朱鐵年【摘要】目的探討吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)對2型糖尿病大鼠肝臟的保護(hù)作用及機(jī)制。方法雄性ethodsMale)ratmodelslydividedintodiabeticmodelanddiabeticPDTCtreatedgroups.AftertheratsinedandliversRNAodelgroupalcontrolgroup(P<0.01),andnodifferenceexisted

2、betodelgroup(P>0.05).PDTCsignificantlyreducedlivercellsteatosisanddamageparedodelgroup.TheexpressionofiNOSmRNAodelgroup(P<0.01),andtheexpressionindiabeticPDTCtreatedgroupodelgroup(P<0.01).ConclusionsPDTCcanreducetheexpressionofiNOSmRNAandliversteatosisandinjury.　　【Keyat

3、e;Diabetes;Fattyliver;iNOS　　隨著糖尿病患病率的增加，出現(xiàn)糖尿病并發(fā)癥的患者逐年增多。對于糖尿病并發(fā)癥人們關(guān)注最多的是血管及神經(jīng)系統(tǒng)病變，而對于糖尿病合并肝臟病變研究較少，有研究表明糖尿病患者中合并肝臟病變高達(dá)50%以上〔1〕。本文從氧化損傷角度探討吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)對糖尿病肝臟病變的治療作用及機(jī)制?！　?材料與方法　　1.1材料鏈脲佐菌素(STZ)及PDTC，均購自美國SantaCruz公司，PCR試劑盒購自Promega公司。清潔級雄性)模型的建立參照Ree

4、d等〔2〕方法建立T2DM大鼠模型。所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)普通飼料1g/kg一次性腹腔注射，共有23只大鼠成模，后隨機(jī)分為兩組，11只為T2DM模型組，12只為PDTC治療組。PDTC治療組給予PDTC腹腔注射治療(50mg/kg)，1次/d，連續(xù)治療1g/kg)腹腔注射治療，其他組給生理鹽水腹腔注射。斷頭處死，分別留取標(biāo)本?！　?.2.2血液指標(biāo)的測定每組隨機(jī)選取6只，處死時留取血液，分離血清，用自動化分析儀測定甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)、游離脂肪酸(FFA)含量。　　1.2.3肝臟HE染色在肝右葉取肝組織塊，用10%

5、中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟切片，HE染色，在光鏡下觀察肝臟形態(tài)學(xué)改變。　　1.2.4RTPCR測定誘生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達(dá)水平使用Trizol試劑抽提組織中的總RNA，測定濃度，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)GenBank中大鼠源iNOS，βactin全長設(shè)計引物。iNOS5′ACCTGGGGAACACCTGGGGATTTT3′(正義鏈)，5′GCTGGGTGGGAGGGGTAGTGATGT3′(反義鏈)。內(nèi)參照βactin：5′GAAGGTGAAGGTCGGAGTC3′(正義鏈)，5′GAAGATGGTGATGGGATTT

6、C3′(反義鏈)。按照PCR反應(yīng)試劑盒說明書，配制25μlPCR反應(yīng)液，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5min，94℃30s，55℃30s，72℃30s，進(jìn)行30個循環(huán)，最后72℃延伸5min。取各目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物8μl，經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，iNOS和βactin的PCR產(chǎn)物分別為218bp和220bp，紫外燈下觀察并拍照。采用ImageJ圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行產(chǎn)物灰度圖像分析，以iNOS與βactin的電泳條帶光密度值的比值作為相對表達(dá)量?！　?.3統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，采用方差齊性檢驗，組間比較采用單因素方差分析?！　?/p>

7、2結(jié)果　　2.1各組大鼠生化指標(biāo)檢測模型組大鼠TC、TG、LDLC、FFA水平均明顯高于對照組，且差異顯著(均P<0.05)，經(jīng)PDTC治療后血TC、LDLC、FFA略有下降，但與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，但是TG下降明顯，且與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1?！　?.2肝臟組織HE染色正常組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完整，肝細(xì)胞索以中央靜脈為中心呈放射狀整齊排列，肝細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞形態(tài)正常。肝竇正常，連接成網(wǎng)狀。糖尿病模型組肝細(xì)胞腫大明顯，胞漿染色不均，肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量大小不一脂肪空泡，肝細(xì)胞邊界不清

8、，細(xì)胞排列紊亂，肝索結(jié)構(gòu)消失，肝小葉結(jié)構(gòu)模糊不清。PDTC治療組肝