不同濃度地塞米松對人骨髓間充質干細胞生物學特性的影響

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1、不同濃度地塞米松對人骨髓間充質干細胞生物學特性的影響：龐金輝，黃煌淵，張權，紀斌，曹成?！菊磕康挠^察不同濃度地塞米松對體外培養(yǎng)人骨髓間充質干細胞(hMSCs)成骨分化、增殖能力及凋亡率的影響。方法以梯度密度分離法獲取人骨髓間充質干細胞進行體外培養(yǎng)，以1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6mol/L4種不同濃度地塞米松分別處理細胞。檢測各組細胞的堿性磷酸酶（ALP）活性；RTPCR法檢測骨橋蛋白(OPN)基因的表達；四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法測定各組細胞的增殖率；流式細胞儀分析細胞凋亡率。結果低濃度(1×10-9mol/L)地塞米松對ALP的表達無顯著作用(P

2、>0.05)，而1×10-8mol/L及以上濃度的地塞米松可明顯增加ALP的活性(P<0.01)；所有實驗組的hMSCs均有OPNmRNA表達，其表達強度隨著地塞米松濃度增加而增強；1×10-9mol/L地塞米松對細胞增殖無明顯影響(P>0.05)，1×10-8mol/L及以上濃度的地塞米松可明顯抑制細胞的增殖(P<0.01)；體外培養(yǎng)的hMSCs凋亡率隨地塞米松濃度的增加而升高(P<0.01)。結論1×10-8mol/L及以上濃度的地塞米松可顯著增強hMSCs成骨分化能力，同時抑制細胞增殖并促進其凋亡?！娟P鍵詞】間充質干細胞；地塞米松；堿性磷酸酶；骨橋

3、蛋白；細胞增殖；凋亡Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofdexamethasoneonthebiologicalcharacteristicsofhumanmesenchymalstemcells(hMSCs)derivedfrombonemarroaryhMSCsethasone(1×10-9,1×10-8,1×10-7and1×10-6mo1/L)．Thealkalinephosphatase(ALP)activityeasured；mRNAofosteopontinerasechainreaction(RTPCR);theprolife

4、rationofhMSCsinedeter.ResultsTreatmentofcellsethasone(1×10-8,1×10-7and1×10-6mo1/L)for8daysledtoasignificantincreaseinALPactivity(P<0.01)．TheosteopontinmRNAethasonerespectively．TheopticaldensityvalueofhMSCstreatedethasonefor6daysethasoneincreasedtheapoptosisrateofallhMSCsculturedinvitro．Concl

5、usionThehighconcentrationofdexamethasone(1×10-8,1×10-7and1×10-6mol/L)inducesthedifferentiationofhMSCstoosteoblasticcells,inhibitstheproliferationofcellsandleadstoanincreaseofitsapoptosisrate．Keyesenchymalstemcells；dexamethasone；alkalinephosphatase；osteopontin；cellproliferation；apoptosis骨髓間充質干細胞

6、(humanmesenchymalstemcells,hMSCs)是近年來骨組織工程和干細胞研究的熱點種子細胞之一。目前已知，地塞米松可以誘導骨髓間充質干細胞向成骨細胞方向分化，但是地塞米松對骨髓間充質干細胞影響的系統(tǒng)性研究較為鮮見。本文探討不同濃度地塞米松對體外培養(yǎng)人骨髓間充質干細胞成骨分化、增殖能力及凋亡率等方面的作用，旨在更深入地了解地塞米松對hMSCs生物學特性的影響。材料與方法1主要試劑DMEM培養(yǎng)基（Hyclone公司）、地塞米松（Sigma公司）、堿性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）定量檢測試劑盒（Sigma公司）、AnnexinV凋亡檢測試劑盒

7、（Bender公司）、TRIzol（Sigma公司）。2人hMSCs的體外培養(yǎng)與觀察骨髓標本均取自無血液疾病或骨病的成年人，事先征得所有獻髓者的同意。將抽取的紅骨髓以磷酸緩沖液（PhosphateBufferedSaline，PBS）稀釋制成懸液，小心疊加至淋巴細胞分離液之上，離心，收集呈云霧狀的有核細胞層，接種于10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，置于37℃，5%CO2及飽和濕度條件下孵育定期換液，待細胞生長至90%融合時，消化傳代。隨機抽取生長良好的細胞