惡性血液病自體造血干細(xì)胞移植后dccik細(xì)胞預(yù)防復(fù)發(fā)探討

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1、惡性血液病自體造血干細(xì)胞移植后DCCIK細(xì)胞預(yù)防復(fù)發(fā)探討：王玲史春雷李穎袁成錄【摘要】目的探討惡性血液病自體造血干細(xì)胞移植后應(yīng)用樹突狀細(xì)胞細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（DCCIK）預(yù)防復(fù)發(fā)的效果。方法12例惡性血液病病人自體造血干細(xì)胞移植后靜脈輸注及腹股溝注射DCCIK細(xì)胞2～3次，觀察疾病的復(fù)發(fā)情況以及DCCIK細(xì)胞輸注后的副作用。結(jié)果7例持續(xù)完全緩解（CR），中位CR期44（32～56）月。4例死亡，其中3例復(fù)發(fā)。結(jié)論DCCIK細(xì)胞治療可能有助于清除微小殘留病，預(yù)防疾病復(fù)發(fā)，延長病人生存期，

2、且副作用小，臨床可以選用DCCIK細(xì)胞預(yù)防自體造血干細(xì)胞移植后惡性血液病的復(fù)發(fā)?！娟P(guān)鍵詞】DCCIK細(xì)胞；造血干細(xì)胞移植；移植，自體；復(fù)發(fā)　?。跘BSTRACT］ObjectiveToobservetheclinicalefficacyofdendriticcellsinbinationalignanthematopathyafterautohematopoieticstemcelltransplantation(AutoHSCT).MethodsAfterautoHSCT,12patien

3、tsalignanthematopathyallyfor2-3timesaission(CR)edianCRperiodonths,fourdied,inentaybehelpfulinclearingminimalresidualdisease,preventingrelapseandprolongingthepatients’lifealignanthematopathyafterautoHSCT.［KEYCSF150μg皮下注射，每天1次，連續(xù)注射1～3d，然后再進(jìn)行細(xì)胞采集?！　?.2.2

4、細(xì)胞采集　　使用細(xì)胞分離單采機(jī)（SPECTRA6.0，COBE公司，美國）采集病人外周靜脈血6～8L，每120～150mL血漿約采集(3～6)×109單個(gè)核細(xì)胞。　　1.2.3抗原制備方法　　根據(jù)腫瘤類型選擇相同病理類型的人腫瘤細(xì)胞株制備抗原，細(xì)胞株均購自中國科學(xué)院上海生物科學(xué)院細(xì)胞資源中心。將腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)至(1～2)×108個(gè)，收集細(xì)胞，生理鹽水洗滌。將細(xì)胞置于RPMI1640培養(yǎng)液中反復(fù)凍融，離心去殘?jiān)?，上清液過濾備用?！　?.2.4DC和CIK細(xì)胞制備　　采集的細(xì)胞按照常規(guī)方法分離并洗滌單個(gè)核

5、細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞的密度至1×1010/L，平均加到16只細(xì)胞培養(yǎng)瓶（美國BD公司）中，于37℃體積分?jǐn)?shù)0.05的CO2培養(yǎng)箱中孵育2h，使貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞分離。取出懸浮細(xì)胞置另外細(xì)胞培養(yǎng)瓶中備用。在含有大量貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中加入含有20μg/LIL4、50μg/LGMCSF的DC無血清培養(yǎng)基（德國CellGenix公司），在37℃體積分?jǐn)?shù)0.05的CO2培養(yǎng)箱中孵育，6d后加入DC培養(yǎng)液和相應(yīng)的腫瘤抗原繼續(xù)培養(yǎng)2d，即為成熟DC，部分回輸，其余凍存。懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中加入適量RPMI1640培養(yǎng)液

6、、滅活胎牛血清和IL2、IFNα、CD3單抗（美國RD公司）細(xì)胞因子等，在37℃體積分?jǐn)?shù)0.05的CO2條件下培養(yǎng)。第8天細(xì)胞部分靜脈回輸，余細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至15d?！　?.2.5細(xì)胞表型檢測和細(xì)胞計(jì)數(shù)　　培養(yǎng)結(jié)束后，采用流式細(xì)胞儀檢測DC標(biāo)志DR和CD83，以CD3為標(biāo)志來鑒定檢測CIK細(xì)胞；回輸前分別計(jì)數(shù)DC和CIK細(xì)胞?！　?.3治療方法自體造血干細(xì)胞移植造血恢復(fù)后1個(gè)月開始回輸DC?；剌斍皩C均分，1份與CIK混合制成250mL細(xì)胞懸液（內(nèi)含1500U/mL的IL2，體積分?jǐn)?shù)0.01的清

7、蛋白），經(jīng)靜脈回輸；1份制成1.5mL細(xì)胞生理鹽水懸液，皮下注射到腫瘤鄰近的淋巴結(jié)區(qū)。上述治療每周進(jìn)行1次，共3次。療程結(jié)束后1個(gè)月隨訪觀察療效。觀察治療前后血清干擾素γ（INFγ）、白介素10（IL10）和白介素12（IL12）含量變化等?！　?.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS10.0及PPMS1.5[1]統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理?！　?結(jié)果　　2.1細(xì)胞表型檢測和細(xì)胞計(jì)數(shù)DC標(biāo)志DR和CD83的表達(dá)率分別為75%～84%和76%～85%，CIKCD3的表達(dá)率為88%～95%。每個(gè)療程細(xì)胞總量：D

8、C為(188.3±79.8)×106個(gè)，CIK為(58.8±22.3)×108個(gè)。　　2.2病人免疫指標(biāo)觀察治療前病人血清INFγ、IL10、IL12含量分別為（42.5±31.5）、（28.5±11.5）、（85.5±60.5）μg/L，治療結(jié)束后1個(gè)月復(fù)查，病人上述指標(biāo)分別為（65.0±45.0）、（30.1±18.1）、（89.1±71.1）μg/L，即治療后血清中INFγ含量明顯升高（t=3.679，P＜0.05），但I(xiàn)L10和IL1