降血壓肽ace抑制活性及降壓功能研究

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1、降血壓肽ACE抑制活性及降壓功能研究【摘要】探討了ACE（血管緊張素轉(zhuǎn)換酶）抑制活性的檢測方法,并以貽貝為原料制取降血壓肽，研究了不同酶解條件對其ACE抑制活性的影響，然后利用SHR飼喂試驗(yàn)檢測其降血壓活性。結(jié)果表明，降血壓肽有較好的ACE抑制活性：其ACE抑制率可達(dá)88.08%。同時動物試驗(yàn)表明其降壓效果明顯,在SHR飼喂后2～6h之內(nèi)均有顯著降壓效果，平均降低為16～28mmHg?！娟P(guān)鍵詞】降血壓肽血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性降血壓【Abstract】ThetestingmethodofACEinhibitor

2、yactivitiesmytiluscoruscus,thentheACEinhibitoryactivitiesethod.TheresultsmHg.【Keye（ACE）inhibitoryactivities；antihypertensiveeffects降血壓肽實(shí)質(zhì)是一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽，它通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE），阻礙有升高血壓作用的血管緊張素Ⅱ的生成，同時抑制具有降血壓作用的血管舒緩激肽的分解，從而使血壓下降，此即降血壓肽的作用機(jī)理［1］。近年來國際學(xué)術(shù)界對降血壓肽的研究較多，已報道

3、有以牛奶、乳酪、大豆、魚肉、蔬菜、小麥蛋白等食物為原料，經(jīng)蛋白酶酶解產(chǎn)生了具有較好ACE抑制活性的降血壓肽［2～7］。Eiji等［8］水解了12種食物蛋白進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，從魚肉、蝦、蟹等水產(chǎn)動物蛋白中制得的降血壓肽其降壓活性優(yōu)于其他食物性蛋白。我國在降血壓肽領(lǐng)域的研究起步相對較晚，現(xiàn)有報道以大豆、蛇毒、老酒、茶葉為原料，對降血壓肽的制備工藝和活性基團(tuán)等方面進(jìn)行了一定研究［9～13］；對于最適合用于降血壓肽制備的水產(chǎn)動物蛋白的開發(fā)研究，則鮮有報道。貽貝，又名海紅、淡菜，近年來人工養(yǎng)殖取得重大成功，在我國東南沿海產(chǎn)

4、量豐富。但由于加工手段和技術(shù)的落后，在收獲季節(jié)產(chǎn)出的大量貽貝因得不到及時處理而造成極大浪費(fèi)［14］。本研究以貽貝為原料，經(jīng)酶解、活性修飾等方法制取降血壓肽，然后利用SHR飼喂試驗(yàn)檢測其降血壓活性，并分析了其相對分子質(zhì)量分布和氨基酸組成，以期為貽貝酶解降血壓肽的開發(fā)提供理論探索。1材料與方法1.1材料與設(shè)備貽貝：市售。ACE標(biāo)準(zhǔn)樣品：Sigma試劑?！　?fù)合生物酶P1（本項目組自行配制），其組分均購自上海生物化學(xué)試劑公司。降血壓肽制備所需其他試劑，均為生化純，上海生物化學(xué)試劑公司提供。降壓功能試驗(yàn)用動物：SHR（

5、自發(fā)性高血壓大鼠），上海高血壓研究所提供。儀器設(shè)備：HPLC（A1,提取，冷凍干燥，制備降血壓肽，以備分析檢測之用。將制備的降血壓肽樣品利用SHR飼喂試驗(yàn)來分析其降壓活性。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1ACE活性抑制檢測方法研究取標(biāo)準(zhǔn)HippuricAcid樣品（光譜級），配制成0.1M溶液，參考前述有關(guān)3結(jié)論3.1ACE抑制活性檢測方法的研究分析0.01～0.05mM和0.10～0.50mM的數(shù)據(jù)，可發(fā)現(xiàn)HippuricAcid在濃度范圍為0.01～0.05mM內(nèi)線性最佳，因此應(yīng)控制有關(guān)反應(yīng)使最終的Hippuric

6、Acid濃度在此范圍之內(nèi)，提高檢測的準(zhǔn)確性。3.2P1酶最佳酶解條件對于ACE抑制結(jié)果進(jìn)行回歸分析，所得回歸方程為:Y=70.464-1.195X1+15.299X2+11.971X3-4.310X22+0.194X1X2-0.141X3X4根據(jù)方程分析最佳的ACE抑制活性為90.23%。但由實(shí)驗(yàn)結(jié)果在此條件下的實(shí)際ACE抑制率為86.55%,所以NO1為最佳條件。其ACE抑制率為88.08%，對應(yīng)的最佳酶解條件為：酶量25IU/ml；酶解時間2h；pH7.0；酶解溫度60℃。具體分析P1的酶解情況，酶量從25

7、IU/ml到175IU/ml，酶解時間2～7h,隨著酶量的增加和酶解時間的延長，其酶解程度增加，但所得降血壓肽的ACE抑制率下降。這是因?yàn)殡S著酶解的進(jìn)行,蛋白質(zhì)逐漸被水解成不同長度的肽斷，其中部分因結(jié)構(gòu)上的某些活性基團(tuán)而具有降血壓活性；但隨著酶解程度提高，部分具有ACE抑制活性的短肽被酶解成氨基酸或其活性基團(tuán)被破壞，從而導(dǎo)致其ACE抑制活性下降。這一點(diǎn)與Kim等［18］通過牛皮膠制備酶解降血壓肽的研究得到的結(jié)論相吻合，在酶解過程中控制酶解程度非常重要，既要使蛋白質(zhì)得到充分的酶解，使更多的活性肽斷被水解出來，但同

8、時又要適當(dāng)控制酶解程度，即并非酶解程度最大時其降壓活性最好。3.3降血壓肽的降壓效果由方差分析結(jié)果，查表得F0.05（2,9）＝4.26，可知對于處理4h和6h血壓變化的F值＞F0.05（2,9），說明服用降血壓肽4h和6h效果差異有顯著性（α＝0.05）。同時，由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，降血壓肽在2～6h之內(nèi)均有顯著降壓效果（α＝0.05），平均降低為16～28mmHg。在6h處降壓效果達(dá)