人羊膜移植在眼科的應(yīng)用

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1、人羊膜移植在眼科的應(yīng)用【關(guān)鍵詞】眼；羊膜；組織移植　1995年Kim和Tseng［1］利用4℃100%甘油保存的人羊膜移植到破壞嚴(yán)重的兔眼表，獲得了眼表重建術(shù)的成功。從此羊膜移植在眼科的應(yīng)用領(lǐng)域被逐漸拓寬?！　?膜的解剖和組織學(xué)特點　　人羊膜厚度為0.02～0.5mm，透明，有韌性，由一層厚的基底膜和無血管無神經(jīng)和淋巴管的基質(zhì)組成。由內(nèi)到外分為5層：上皮細(xì)胞層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層。在基底膜面與絨毛膜之間有一潛在間隙，容易鈍性分離。成熟期羊膜細(xì)胞表面及側(cè)面有許多呈圓柱狀、排列規(guī)則或不規(guī)則的微絨毛，其參與形成復(fù)雜扭曲的細(xì)胞

2、間迷路管道系統(tǒng)。離體細(xì)胞實驗和組織培養(yǎng)顯示上皮細(xì)胞有合成、分泌和沉積基底膜、細(xì)胞外間質(zhì)成分的能力。羊膜的基底膜是全身最厚的基底膜，為0.1μm，含有Ⅳ型膠原等多種膠原成分?；啄は碌闹旅軐雍?～50μm不等，其主要功能是支持表面上皮生長［1，2］。因此羊膜細(xì)胞間的迷路管道系統(tǒng)有利于進(jìn)行物質(zhì)交換;豐富的膠原成分增強(qiáng)了其韌性;同時透明、無血管等組織特性使羊膜成為較為理想的眼表重建供體材料?！　?羊膜的生理和免疫學(xué)特征　　動物實驗和臨床研究顯示，羊膜是一種理想的支持上皮生長的物質(zhì)，可延長其生命，維持其克隆。羊膜基底膜可以刺激結(jié)膜杯狀細(xì)胞的分化

3、、促進(jìn)結(jié)膜干細(xì)胞分化為結(jié)膜上皮細(xì)胞、促進(jìn)結(jié)膜上皮向角膜上皮轉(zhuǎn)化，促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞增殖和角膜上皮細(xì)胞移行。羊膜基質(zhì)中所含的一種成分，能抑制β轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)信號傳遞，抑制正常人角膜緣成纖維細(xì)胞的增殖和分化成為纖維細(xì)胞，減少瘢痕化，抑制新生血管形成。羊膜基質(zhì)中不同形式的蛋白酶抑制因子，通過改變蛋白酶活性，清除炎癥細(xì)胞，促使其迅速凋亡。在正常環(huán)境條件下保存人羊膜不表達(dá)人類白細(xì)胞抗原，因此不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)［1，2］。　　3羊膜移植治療眼表疾病的理論基礎(chǔ)　　deRott［3］最早將新鮮羊膜用于眼病的治療，將新鮮活體羊膜連同絨毛膜一起移

4、植到眼球表面，以治療瞼球粘連。Kim［1］用保存在4℃、100%甘油中的人羊膜，成功重建眼表層兔眼表面模型，提示角結(jié)膜上皮化、阻止宿主纖維血管物質(zhì)內(nèi)生到羊膜上。避免了活體植片發(fā)生排斥反應(yīng)，證明保存人羊膜可推廣于臨床。羊膜可以促進(jìn)正常結(jié)膜上皮化，防止廣泛性結(jié)膜下纖維化瘢痕形成［4］。它有Ⅳ型膠原、整合素、板層體等［1］多種成分，可作為結(jié)膜上皮化的合適附著物。故此，羊膜移植可看作是“底物移植”［2］。羊膜移植的機(jī)制不同于其它類型的粘膜移植，它移植的是上皮活細(xì)胞，功能是作為眼表上皮的替代物質(zhì)。羊膜移植中羊膜一旦被結(jié)膜上皮覆蓋，就與結(jié)膜下組織不

5、可區(qū)分。因此，具有顯著改善外觀的優(yōu)點。羊膜抑制結(jié)膜下纖維化的機(jī)制并不十分清楚。由于羊膜在鞏膜上形成了連續(xù)性膠原薄片，可能首先具有抑制結(jié)膜下纖維化的機(jī)械屏障功能［5］。羊膜可能促進(jìn)正常上皮化，上皮細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞通過細(xì)胞因子的相互作用，可以抑制成纖維細(xì)胞形成。羊膜上皮細(xì)胞也可能產(chǎn)生某些生長因子，如堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)和β-TGF。這些生長因子可以調(diào)控基質(zhì)成纖維細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞的增殖和分化。Ma等［6］從分子生物學(xué)角度為羊膜移植的可行性提供了理論依據(jù)。研究表明羊膜能消除炎癥及瘢痕化，重建正常上皮表型的一個重要原因是羊膜基質(zhì)對成

6、纖維細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的水平具有調(diào)節(jié)作用。它通過成纖維細(xì)胞移行上或移行進(jìn)羊膜基質(zhì)中，抑制了β1轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)的表達(dá)，而TGF-β1是一種在傷口愈合過程中調(diào)整成纖維細(xì)胞活性的纖維生長原型細(xì)胞因子。這一觀點已經(jīng)被TGF-β1細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄表達(dá)及Northern核酸雜交實驗所證實。當(dāng)然，為證實這一觀點的正確性，應(yīng)繼續(xù)研究其它細(xì)胞因子的表達(dá)方式。羊膜移植除了對眼表上皮和纖維組織的作用外，還具有其它幾個適于眼表手術(shù)的特點：①羊膜獲取比較容易，應(yīng)用幾乎不受限制，一個胎盤的羊膜可以制作20塊3cm×3cm大小的組織塊，在-80℃條件下最少可

7、保存幾個月；②在正常環(huán)境條件下保存的人羊膜不表達(dá)人類白細(xì)胞抗原，因此勿需擔(dān)心手術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)；③由于羊膜具有抗病原微生物的功能，因此與口腔粘膜移植相比較，羊膜移植術(shù)后感染機(jī)會大大減少；④羊膜具有很強(qiáng)的抗粘附效果，對于眼表疾患的許多嚴(yán)重并發(fā)癥，羊膜移植可有利于穹窿結(jié)膜囊的成形，防止瞼球粘連的發(fā)生，促進(jìn)彎月形淚液膜正常生理結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)［6］?！　?羊膜的制備和保存　　從剖宮產(chǎn)或順產(chǎn)無菌接生獲得胎盤，供體(產(chǎn)婦)產(chǎn)前血清學(xué)檢查，排除含有人類免疫缺陷性疾病(HIV)、乙肝病毒(HBV)和梅毒者；且產(chǎn)婦(供體)產(chǎn)道淋球菌、衣原體陰性。取出胎盤后

8、即行滅菌處理。Prabhasal青霉素、50μg/ml鏈霉素、100μg/ml新霉素、2.5μg/ml兩性霉素B的Earle平衡鹽溶液沖洗胎盤并獲取羊膜。將羊膜平鋪于硝酸纖維濾紙上并剪成3cm×4cm大小，