南蛇藤中扁蒴藤素提取分離工藝研究

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1、南蛇藤中扁蒴藤素提取分離工藝研究作者：馮玉靜，王定勇，陳銘祥【摘要】　　目的對(duì)南蛇藤中扁蒴藤素提取純化工藝進(jìn)行研究。方法南蛇藤根粉經(jīng)丙酮冷浸提取后，采用聚酰胺柱層析及硅膠柱層析進(jìn)行分離純化；以HPLC法測(cè)定產(chǎn)品中扁蒴藤素的含量，并以其為指標(biāo)對(duì)分離純化的主要工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果將待分離的南蛇藤丙酮浸膏和聚酰胺(60～100目)按物料比0.02（質(zhì)量比）裝入層析柱中，常壓下用體積分?jǐn)?shù)75%的甲醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，收集流分，濃縮后得到粗品，經(jīng)硅膠柱層析進(jìn)一步純化，再經(jīng)重結(jié)晶后純度提高到98.0%以上。結(jié)論該工藝簡(jiǎn)單、成本較低，適于工業(yè)

2、化。【關(guān)鍵詞】南蛇藤扁蒴藤素聚酰胺柱層析硅膠柱層析分離純化　　Abstract:ObjectiveTostudytheisolationandpurificationconditionofpristimerinfromCelastrusorbiculatusThunb.MethodsPristimerinidecolumnchromatographyandsilicagelcolumnchromatography,andthecontentofpristimerininedbyHPLC.Themainisolationfactors

3、ized.ResultsTheoptimumisolationconditionspletopolymideethanolnchromatographyandrecrystallized.Finally,thepurityreachedto98%.ConclusionThismethodissimpleandeconomic,erin；polyamidecolumnchromatography；silicagelcolumnchromatography　　南蛇藤CelastrusorbiculatusThunb.系衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物

4、，又名過(guò)山風(fēng)、苦樹(shù)皮等。全草均可入藥，有清熱、祛風(fēng)、除濕、活血、解毒等功效，常用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腰腿痛等癥［1］。目前已從南蛇藤植物中分離得到60余種化合物，主要為β二氫沉香呋喃倍半萜多醇酯、生物堿、三萜類(lèi)，此外還有黃酮類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)、多元醇類(lèi)、甾體類(lèi)及鞣質(zhì)［2］。1996年,蔣毅［3］等從南蛇藤根皮中提取出橙紅色結(jié)晶扁蒴藤素。　　　　扁蒴藤素是一種醌甲基三萜類(lèi)化合物，具有廣譜抗腫瘤［3,4］、抗炎［5］、抗氧化［6］等多種藥理活性，主要存在于衛(wèi)矛科和希藤科植物中。有研究發(fā)現(xiàn)，在給藥初期的24h內(nèi)，非致瘤性的人類(lèi)乳房上皮細(xì)胞菌株

5、MCF10A對(duì)扁蒴藤素的抵制力是人乳腺癌細(xì)胞（MDAMB231）的2倍，表明扁蒴藤素對(duì)腫瘤細(xì)胞具有很好的選擇性，可開(kāi)發(fā)成為高選擇性的抗腫瘤化療藥［7］。2008年,Yang等［8］發(fā)現(xiàn)扁蒴藤素為一種新的蛋白酶體抑制劑，使得扁蒴藤素成為抗腫瘤研究的熱點(diǎn)。南蛇藤分布廣泛，在我國(guó)東北、華北、華東、西北、西南及湖北、湖南、廣東等均有分布，資源豐富，因此目前的研究常選擇南蛇藤作為扁蒴藤素的來(lái)源植物。目前已有一項(xiàng)從粉背南蛇藤(Celastrushypoleucus)中提取扁蒴藤素的工藝專(zhuān)利［9］，本文選擇南蛇藤作為來(lái)源植物，采用聚酰胺柱層

6、析和硅膠柱層析結(jié)合的雙柱層析的方法得到高純度的扁蒴藤素?！　?材料與方法　　1.1材料與試劑　　　　南蛇藤根皮采自廣東陽(yáng)春，扁蒴藤素對(duì)照品為實(shí)驗(yàn)室自制（經(jīng)HPLC測(cè)定，純度≥98%），甲醇（色譜純，迪馬公司），甲醇、石油醚、乙酸乙酯（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司），水（自制超純水/蒸餾水），聚酰胺（60～100目，浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠），硅膠（200～300目，青島海洋化工廠分廠）?！　?.2儀器　　　　RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠)；SHZD(Ⅲ)循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)科技有限公司；LC

7、10ATvp高效液相色譜儀（SHIMADZU）；SPDM10Avp紫外檢測(cè)器（SHIMADZU）?！　?.3實(shí)驗(yàn)方法　　　　將丙酮提取液過(guò)濾，濃縮，拌入聚酰胺，烘干，研磨，過(guò)篩，得粗品，經(jīng)聚酰胺柱層析分離，以HPLC法測(cè)定粗品中扁蒴藤素的含量，以產(chǎn)品得率和產(chǎn)品純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù))為指標(biāo)，分別考察洗脫劑、物料比等影響因素，優(yōu)化出最佳的分離工藝參數(shù)。粗品再通過(guò)硅膠柱層析進(jìn)一步純化，得到較純品。再選用不同的溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，從中選出最佳的溶劑進(jìn)行精制，得到扁蒴藤素橙紅色針狀結(jié)晶。　　1.4扁蒴藤素的含量測(cè)定方法　　1.4.1對(duì)照品溶液的配制

8、精密稱(chēng)取扁蒴藤素對(duì)照品5.1mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻，制得質(zhì)量濃度為204.0μg/mL的對(duì)照品溶液。分別吸取1、2、3、4、5mL的對(duì)照品溶液于10mL的量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，得質(zhì)量濃度依次為2