紫萍提取物對過氧化氫誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護作用研究

《紫萍提取物對過氧化氫誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護作用研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、紫萍提取物對過氧化氫誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護作用研究【摘要】目的研究紫萍提取物是否具有保護內(nèi)皮細(xì)胞免受過氧化氫損傷的作用。方法采用MTT比色法篩選紫萍提取物作用于內(nèi)皮細(xì)胞的安全劑量，建立H2O2對內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷模型，并研究紫萍提取物的保護作用。最后采用檢測試劑盒方法分析紫萍提取物作用后內(nèi)皮細(xì)胞中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性變化。結(jié)果紫萍提取物的濃度<100μg/ml，作用時間為24h時，無明顯細(xì)胞毒性。以1mmol/L的H2O2作用于ECV-304細(xì)

2、胞1h造氧化損傷模型，10，25，50μg/ml的紫萍提取物具有預(yù)防氧化損傷作用，可使細(xì)胞的存活率由21.98%分別上升至37.49%，51.71%和64.74%，其機理可能是紫萍提取物能夠劑量依賴性的增強SOD，CAT和GSH-Px等酶的活性。但是紫萍提取物無治療氧化損傷的作用。結(jié)論紫萍提取物可以有效保護內(nèi)皮細(xì)胞免受氧化損傷?！娟P(guān)鍵詞】紫萍氧化損傷過氧化氫超氧化物歧化酶過氧化氫酶谷胱甘肽過氧化物酶Abstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectofSpirodelapolyrrh

3、iza(L.)SchlEidextract(SE)againstthedamagecausedbyhydrogenperoxide(H2O2)inhumanvascularendothelialcells(ECV-304).MethodsNormalECV-304cellsfor24h-96h,orH2O20.125～10mmol/Lfor1～24h,thesurvivalrateofcellsinedbytetrazoliumassay(MTT).ToevaluatetheprotectiveeffectofSEonE

4、CV-304injuryinducedbyH2O2,ECV-304odel,andSEtreatmentgroups.InSEtreatmentgroup,ECV-304lfor24h，beforeorafterH2O21mmol/L(finalconcentration)odelgroupandtheSEtreatmentgroupfor1h.ThesurvivalconditionsofECV-304ore,theactivitiesofSOD,CATandGSH-PxinECV-304cellstreatedlSE

5、inedbythecorrespondingassaykits.Results5，10，25，50μg/mlSEhadnosignificantcytotoxicityonECV-304at24h，but100μg/ml,200μg/ml,and400μg/mlSEmarkedlydecreasedthesurvivalrateat24h.TheviabilityofECV-304mol/LH2O2at1h.PretreatedlSE,thesurvivalrateandtheactivitiesofSOD,CATand

6、GSH-Pxincellsanner.ButSEhadnoprotectiononECV-304injuryinducedbyH2O2.ConclusionSEhasdualeffectsonthesurvivalrateofECV-304invitro,entlSEcanprotectECV-304againstH2O2injury.Key的微孔過濾器過濾。RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清購自GIBCO公司；SOD，GSH-Px，CAT測定試劑盒均購自南京建成生物研究所；MTT購自Sigma公司。2方法2.1ECV-

7、304的培養(yǎng)ECV-304培養(yǎng)于含10%的胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置于37℃的細(xì)胞培養(yǎng)箱中（5%CO2），待細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶80%～90%左右時，用0.25%胰酶＋0.02%EDTA的消化液進行傳代培養(yǎng)。2.2四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法MTT溶解于PBS中，配成5mg/ml的溶液，0.22μm的微孔濾膜過濾后避光保存，于一周內(nèi)用完。在加入MTT前，吸棄培養(yǎng)板中各孔的培養(yǎng)液，PBS洗1～2次，然后加入新鮮培養(yǎng)液和10%的MTT，于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h后，吸棄培養(yǎng)液，加入200μl的DMSO，在振蕩器上振蕩1

8、0min，待充分溶解后，于Model550多孔酶標(biāo)儀570nm處檢測吸光值。2.3SE對ECV-304細(xì)胞的影響（4～5）×104個/ml密度的ECV-304細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl。培養(yǎng)24h后，吸棄培養(yǎng)液，加入含藥培養(yǎng)液，SE的終濃度分別為5，10，25，50，100，200，400μg/ml，另