hla drb1 基因多態(tài)性與貴州地區(qū)漢族人群結(jié)核病的易感性分析

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1、HLADRB1基因多態(tài)性與貴州地區(qū)漢族人群結(jié)核病的易感性分析【關(guān)鍵詞】HLADRB1基因;多態(tài)性;易感性;結(jié)核病;貴州省StudyontheassociationofthepolymorphismsofHLADRB1genesentofClinicalMicrobiologyandImmunology,HainanMedicalCollege,Haikou571101,China)[ABSTRACT]Objective:TodetermineorphismsoftheHLADRB1geneareassoci

2、atedorphismsoftheHLADRB1geneerasechainreactionsequencespecificprimers(PCRSSP)techniqueamong53healthycontrolsand47tuberculosiscasesofHanpeoplefromGuizhouprovince.Results:ThefrequencyofHLADRB1*16alleleintuberculosiscasesaybeassociatedonarytuberculosisinthisp

3、opulation.　　[KEYarker購自大連寶生物工程有限公司,HLADRB1PCRSSP分型試劑盒購自美國Lambda公司?！　?.3　標(biāo)本采集　　靜脈采血約2～3mL,用EDTA.Na2抗凝備用?！　?.4　DNA提取　　采用DNA抽提試劑盒嚴(yán)格按說明書操作。提取的DNA用紫外分光光度計(jì)測定濃度和純度,A260/280nm應(yīng)在1.6～1.8,DNA濃度在80ng/μL,抽提的DNA于20℃保存?zhèn)溆?。　?.5　PCRSSP分析HLADRB1基因多態(tài)性　　按試劑盒說明操作,對(duì)抽提的DNA樣本進(jìn)行P

4、CR擴(kuò)增。擴(kuò)增條件:96℃預(yù)變性150s;96℃變性15s，65℃復(fù)性60s，共10個(gè)循環(huán);95℃變性15s，62℃復(fù)性50s，72℃延伸30s,共22個(gè)循環(huán)。取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠上100V穩(wěn)壓電泳1h，于凝膠成像儀觀察結(jié)果,按試劑盒提供的基因電泳格局圖確定基因位點(diǎn)?！　?.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　　患者組與正常組之間基因頻率差異分析采用χ2檢驗(yàn),當(dāng)1≤T<5,但n≥40時(shí),用連續(xù)性校正檢驗(yàn);當(dāng)T<1或n<40時(shí),用Fisher精確檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！　?結(jié)果　　2.1

5、　PCRSSP分析HLADRB1基因多態(tài)性　　根據(jù)各PCR產(chǎn)物是否擴(kuò)增出目的片段綜合判定HLADRB1基因型,如圖1顯示該例基因型為HLADRB1*04/15?！　?.2　等位基因HLADRB1基因頻率的比較　　HLADRB1基因共出現(xiàn)13個(gè)位點(diǎn),基因頻率見表1。在53例正常對(duì)照組的HLADRB1等位基因中,DRB1*03、DRB1*08、DRB1*09、DRB1*11及DRB1*12等位基因頻率較高;而DRB1*01、DRB1*04、DRB1*15及DRB1*16等位基因頻率較低。在47例結(jié)核病患者

6、的HLADRB1等位基因中,DRB1*04、DRB1*08、DRB1*09、DRB1*14及DRB1*16等位基因的頻率較高;而DRB1*01、DRB1*11及DRB1*12等位基因頻率較低。其中DRB1*16等位基因頻率明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05);DRB1*11等位基因頻率明顯低于正常對(duì)照組，(P<0.05),其他差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1病例組與正常對(duì)照組HLADRB1等位基因頻率分布　　3討論　　大量研究表明，結(jié)核病的發(fā)生不僅與環(huán)境因素有關(guān)，還與機(jī)體的遺傳因素密切相關(guān)。不同種族人群攜帶的不

7、同基因可能影響結(jié)核病的易感性[2]。HLA復(fù)合體作為人體最復(fù)雜的基因系統(tǒng)，與結(jié)核病的相關(guān)性越來越受到研究者的重視，尤其是其中的HLADRB1等位基因更成為研究的重點(diǎn)。但關(guān)于HLADRB1等位基因與結(jié)核病易感性的相關(guān)性研究結(jié)果不盡相同，這也表明不同種族人群中易感基因是有差別的。本文旨在研究中國漢族人群HLADRB1等位基因與結(jié)核病易感性的相關(guān)性，通過對(duì)47例貴州地區(qū)漢族結(jié)核病人及53例正常對(duì)照的研究發(fā)現(xiàn)，病人組中DRB1*16等位基因頻率明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05);而DRB1*11等位基因頻率明顯

8、低于正常對(duì)照組，(P<0.05)。說明DRB1*16等位基因可能為中國漢族人群結(jié)核病的易感基因，DRB1*11等位基因可能為結(jié)核病的保護(hù)性基因。這與劉志輝[3]等報(bào)道的中國南方漢族人群結(jié)核病的易感基因?yàn)镈RB1*16是一致的，但保護(hù)性基因卻不同，劉志輝[3]等報(bào)道的為DRB1*13.3及DRB1*01,而本研究結(jié)果為DRB1*11，說明易感基因與保護(hù)基