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1、硫氫化鈉后處理對培養(yǎng)心肌細胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護作用【關(guān)鍵詞】硫化氫后處理心肌細胞培養(yǎng)缺氧復(fù)氧損傷大鼠Abstract：ObjectiveToexploretheprotectiveeffectsofH2Sdonor-NaSHpostconditioningontheprimary-culturedneonatalratmyocardialcellsexposedtohypoxia/reoxygenation（H/R）injury.MethodsPrimary-culturedmyocardialcellsfromneonatalratslydivi
2、dedinto4groups:controlgroup（normal）,hypoxia/reoxygenationgroup（H/R）,hypoxiapostconditioninggroup（HPC）andNaHSpostconditioninggroup（H/R+NaHS）.AmodelofH/Rinjuryutase(SOD),andthecontentofmalondialdehyde(MDA)inedatthepointsofpre-hypoxia,hypoxiafor2handreoxygenationfor0.5h,1hand2h.Re
3、sultsNoobviouschangesmol·g-1and（0.986±0.042）mmol·g-1vs（1.120±0.045）mmol·g-1,P﹤0.05］;buttheSODactivityainedhigherthanintheH/Rgroup,andtheactivityofLDHandthecontentofMDAkepttobeloyocardialcellsagainsthypoxia/reoxygenationinjurybyenhancingthescavengingofoxygen-derivedfreeradicals.
4、Keyyocardialcellculture;hypoxia/reoxygenationinjury;rat缺血后處理(ischemicpostconditioning)［1］是可以有效對抗缺血/再灌注損傷的一種重要內(nèi)源性保護機制，長時間缺血后再灌注前，短時間內(nèi)反復(fù)短暫的再缺血處理，可以明顯減輕缺血組織的缺血/再灌注損傷。藥物后處理是用藥物模擬缺血后處理的方式，試圖達到與缺血后處理相似的保護效果。內(nèi)源性硫化氫（H2S）作為新發(fā)現(xiàn)的氣體信號分子，其心肌保護作用近年來受到高度的關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，缺血前給予外源性硫化氫鈉（NaHS）可改善因缺血/再灌注損傷
5、（ischemiareperfusioninjury,IRI）引起的心肌功能障礙和心肌損傷［2］。但NaHS后處理的心肌保護作用尚未見報道。本研究采用原代培養(yǎng)的大鼠乳鼠心肌細胞，建立缺氧/復(fù)氧損傷模型，探討NaHS后處理對培養(yǎng)心肌細胞IRI的保護作用及其可能的機制。1材料和方法1.1實驗材料胎牛血清（杭州四季青有限公司）；DMEM培養(yǎng)基（GIBCO，America）；膠原酶I、胰蛋白酶（Sigma）；乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(malondi
6、aldehyde,MDA)試劑盒，考馬斯亮藍法蛋白測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所出品；其余試劑均為國產(chǎn)分析純產(chǎn)品。二氧化碳培養(yǎng)箱（上海），N750紫外分光光度計（上海）。1.2實驗方法1.2.1乳鼠心肌細胞原代培養(yǎng)選出生1～3天內(nèi)的SpragueDaal組）：將心肌細胞放入37℃含95%空氣、5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中，用復(fù)氧液〔mmol·L-1,0.9Na2HPO4，20.0NaHCO3,1.8CaCl2，1.2MgSO4,55.0葡萄糖,20.0HEPES(hydroxyerhylpiperazineerhanesulfonicacid,
7、羥乙基哌嗪乙磺酸)，129.5NaCl和5.0KCl，pH7.4〕培養(yǎng)4h。②缺氧/復(fù)氧組（H/R組）:參照文獻［3］，將心肌細胞換用高純氮氣飽和30min、氧分壓低于7kPa的模擬缺氧液(mmol·L-1，0.9Na2HPO4、6.0NaHCO3、1.8CaCl2、1.2MgSO4、40乳酸鈉、20HEPES、98.5NaCl和10.0KCl、pH6.8)，并置于37℃含95%N2、5%CO2的密閉容器中缺氧2h，然后換為復(fù)氧液在二氧化碳培養(yǎng)箱中復(fù)氧2h。③缺氧后處理組（HPC組）：缺氧2h后，參照文獻［4］方法給予缺氧后處理。先用復(fù)氧液培養(yǎng)5mi
8、n，然后換為缺氧液培養(yǎng)5min，復(fù)氧液5min/缺氧液5min重復(fù)3次，共計30min，再繼續(xù)用復(fù)氧液培養(yǎng)1
