加味桃核承氣湯對(duì)肝纖維化大鼠tgfβ1蛋白表達(dá)的影響

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1、加味桃核承氣湯對(duì)肝纖維化大鼠TGFβ1蛋白表達(dá)的影響：趙治友鄔亞軍張俊杰林庚庭周庚生汪國(guó)運(yùn)【摘要】[目的]觀察加味桃核承氣湯對(duì)四氯化碳肝纖維化大鼠肝組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)蛋白表達(dá)的影響。[方法]用四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，研究分組為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、加味桃核承氣湯高、中、低劑量治療組和秋水仙堿對(duì)照組;灌胃給藥，療程8周;用免疫組化技術(shù)檢測(cè)肝組織TGFβ1的蛋白表達(dá);檢測(cè)血清ALT、AST水平;用苦味酸天狼紅膠原染色方法進(jìn)行半定量肝纖維化計(jì)分(SSS)。[結(jié)果]高、中、低劑量組及秋水仙堿組的TGFβ

2、1的表達(dá)水平均低于模型對(duì)照組;經(jīng)加味桃核承氣湯治療后血清ALT、AST水平及肝纖維化SSS計(jì)分顯著下降。[結(jié)論]加味桃核承氣湯可抑制肝纖維化大鼠TGFβ1的表達(dá)，達(dá)到抗肝纖維化作用?！娟P(guān)鍵詞】加味桃核承氣湯;四氯化碳;大鼠;肝纖維化　　Abstract：[Objective]TostudytheeffectsofTGFβ1ofJiaodelsentalratsalcontrolgroup，modelcontrolgroup，colchicinepositivetreatmentgroup，highdose，mediumdo

3、se，loentgroups.Drugsinistration.Proteinexpressionlevelsoftransfergroinedmunohistochemicalstainingmethod.Scoresofhepaticfibrosisiquantitivescoringsystem(SSS)throughtianlanghongstaining.[Results]TheproteinexpressionlevelsofTGFβ1inthelivertissuesinmodelcontrolgrouparked

4、lyincreasedparedalcontrolgroup.ScoresofhepaticfibrosisandthelevelsofserumALTandASTinmodelcontrolgroupalcontrolgroup，butloentgroupsodelcontrolgroupandthreejiaentgroups.[Conclusion]Jiaa公司。兔抗鼠TGFβ1單克隆抗體：武漢博士德公司，二抗：美國(guó)Zymed公司;(4)主要儀器：切片機(jī)：德國(guó)Leca;生物顯微鏡：日本OLYMPUSCHK;高清晰度彩色病理

5、圖文報(bào)告分析系統(tǒng)：武漢同濟(jì)醫(yī)科大學(xué);電子天平：上海第二天平衡器廠。　　1.2方法　　1.2.1模型復(fù)制方法[1]將CCl4與橄欖油以4∶6(體積比)配成40%油劑，首劑按0.5ml/100g體重腹腔注射，以后按0.3ml/100g體重腹腔注射，2次/周，第4周末，大鼠中期肝纖維化形成并開始治療，治療期間繼續(xù)CCl4腹腔注射，以維持病因刺激至第12周末?！　?.2.2分組造模過程共死亡8只大鼠，將余下的132只大鼠肝纖維化模型隨機(jī)分為加味桃核承氣湯低劑量組27只、加味桃核承氣湯中劑量組27只、加味桃核承氣湯高劑量組26只、秋水仙堿組

6、26只、模型對(duì)照組26只;造模前設(shè)有正常對(duì)照組10只。共6組?！　?.2.3給藥方法于第4周末開始給藥。加味桃核承氣湯低、中、高劑量組分別按每100g體重0.25ml、0.5ml、1.0ml的劑量灌胃給藥;秋水仙堿組按每kg體重0.1mg的劑量，秋水仙堿用生理鹽水溶解后灌胃;模型對(duì)照組、正常對(duì)照組以同體積生理鹽水灌胃。療程均為每天1次，連用8周?！　?.2.4標(biāo)本的提取方法治療8周后，股動(dòng)脈取血作肝功能指標(biāo)檢測(cè);取肝組織用10%福爾馬林固定，用作組織病理學(xué)觀察?！　?.2.5觀察指標(biāo)(1)一般情況：觀察大鼠精神、食欲、毛色、二便及

7、舌質(zhì)的變化，觀察肝臟質(zhì)地。(2)肝功能指標(biāo)血清ALT、AST測(cè)定：日本島津7200型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。(3)肝組織病理學(xué)觀察：肝組織經(jīng)石蠟包埋、切片，作HE染色、苦味酸-天狼紅膠原染色，觀察肝細(xì)胞變性、纖維組織增生情況。按2000年全國(guó)肝炎防治會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)(2000標(biāo)準(zhǔn))觀察肝纖維化變化情況[2]，再按肝纖維化組織半定量計(jì)分系統(tǒng)(SSS)計(jì)分[3]。(4)肝組織TGFβ1的蛋白表達(dá)，采用免疫組織化學(xué)染色法。肝組織經(jīng)石蠟包埋、切片、二甲苯脫蠟、乙醇水化;PBS液洗5min，共3次;3%H2O2室溫孵育30min;PBS液洗3

8、次，5min/次;加抗TGFβ1抗體，濕盒內(nèi)置37℃孵箱內(nèi)2h;PBS液洗3次，5min/次;加二抗，37℃孵箱內(nèi)置1h;PBS液洗3次，5min/次;DAB顯色10min;流水終止反應(yīng)3min;蘇木素復(fù)染3min;流水洗1min;1%鹽酸酒精分