曲克蘆丁與牛血清白蛋白相互作用的光譜研究

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1、曲克蘆丁與牛血清白蛋白相互作用的光譜研究：孫榮梅，于麗燕，陳昌云【摘要】目的：應(yīng)用光譜技術(shù)研究曲克蘆丁(troxerutin,TRO)與牛血清白蛋白(bovineserumalbumin,BSA)間結(jié)合作用機(jī)制。方法：通過(guò)熒光光譜法確定曲克蘆丁對(duì)BSA的熒光猝滅機(jī)制。依據(jù)熱力學(xué)參數(shù)討論兩者之間的主要作用力類型。利用同步熒光光譜考察曲克蘆丁對(duì)BSA構(gòu)象的影響。結(jié)果：曲克蘆丁對(duì)BSA的熒光猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅;反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)ΔH=-77.06KJ/mol，ΔS=-152.20J/(mol·K)。結(jié)論：曲克蘆丁與BSA之

2、間的主要作用力是范德華力;曲克蘆丁的加入使BSA構(gòu)象發(fā)生了變化?！娟P(guān)鍵詞】牛血清白蛋白;曲克蘆丁;熒光猝滅;同步熒光光譜　　[Abstract]Objective:Appliedspectroscopytostudytheinteractionmechanismoftroxerutinandbovineserumalbumin(BSA).Methods：FluorescencespectroscopymethodinethefluorescencequenchingmechanismofBSAcausedbytro

3、xerutin.Accordingtothethermodynamicparametersthemajorforcetypesbetalbuminetry.Results：Thequenchingmechanismoftroxerutintobovineserumalbuminodynamicparametersofthereactionol，ΔS=-152.20J/(mol·K).Conclusion：Themainbindingforcebetalbumincouldchangetheserumproteinc

4、onformation.　　[Keyalbumin;troxerutin;fluorescencequenching;synchronousfluorescencespectroscopy　　曲克蘆丁(troxerutin,TRO)系蘆丁經(jīng)羥乙基化制成的半成品黃酮化合物。具有抑制紅細(xì)胞和血小板凝結(jié)，防止血栓形成的作用;同時(shí)能增加血中氧的含量，改善微循環(huán)，促進(jìn)新生血管形成以增進(jìn)側(cè)支循環(huán)的開放[1]。結(jié)構(gòu)見圖1。血清白蛋白是血漿中含量最豐富的載體蛋白，它能和許多內(nèi)源性物質(zhì)廣泛結(jié)合。各種藥物進(jìn)入人體一般都要通過(guò)血漿的貯存

5、和運(yùn)輸，而后才能到達(dá)受體部位并發(fā)生藥理作用?！　⊙芯克幬锱c血清白蛋白的相互作用具有重要的理論意義[2]。蛋白質(zhì)的功能與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，研究中藥有效成分對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響，不僅能為確定中草藥有效成分及作用強(qiáng)度提供一定信息，而且對(duì)全面闡明小分子化合物與蛋白質(zhì)的結(jié)合機(jī)制也有重要意義，同時(shí)也有利于了解中藥的作用機(jī)制。本文研究了TRO與牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)的作用機(jī)制以及溫度對(duì)結(jié)合常數(shù)的影響。分析了TRO與BSA的結(jié)合模式，從分子水平認(rèn)識(shí)該反應(yīng)的作用機(jī)制?！　D1曲克蘆丁的結(jié)構(gòu)　　Fig

6、1Thestructureoftroxerutin　　1材料與方法　　1.1儀器和試劑　　TU1901PC型分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)，LS50B型熒光分光光度計(jì)(美國(guó)PerkinElmer公司)，PHS25型PH計(jì)(上海雷磁儀器廠);TRO(中國(guó)藥品生物制品檢定所),牛血清白蛋白(Sigma公司);三羥甲基氨基甲烷(Tris)、鹽酸、氯化鈉等試劑均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水?！　?.2溶液配制　　用0.9%NaCl配成pH=7.4的TrisHCl緩沖液來(lái)配制濃度為1.0×10-3mol/

7、L的TRO儲(chǔ)備液備用;以TrisHCl緩沖溶液(pH=7.4，含0.1mol/LNaCl以維持溶液的離子強(qiáng)度)為溶劑配制1.0×10-4mol/L的BSA儲(chǔ)備液備用?！　?.3實(shí)驗(yàn)方法　　熒光光譜的測(cè)定：取3ml1.0×10-6mol/L的BSA溶液于1cm的石英比色皿中，用微量注射器逐次加入濃度為1.626×10-3mol/L的TRO溶液進(jìn)行滴定，加樣體積由實(shí)驗(yàn)點(diǎn)濃度計(jì)算確定(滴定劑累加體積小于100μl)。以278nm為激發(fā)波長(zhǎng)，繪制300～500nm波長(zhǎng)范圍的熒光光譜;同步熒光光譜實(shí)驗(yàn)中同時(shí)掃描激發(fā)和發(fā)射單

8、色器，固定激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)差分別為60nm和20nm，其他同熒光光譜測(cè)量。　　紫外吸收光譜的測(cè)定：移取10ml1×10-4mol/L的曲克蘆丁溶液于10ml比色管中,加入pH=7.4的TrisHCl緩沖溶液定容至刻度,以TrisHCl緩沖溶液做參比,測(cè)定紫外吸收光譜。　　2結(jié)果　　2.1紫外光譜的研究　　由BSA,TRO及TROBSA(1∶1)復(fù)合體系的