高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方銀杏葉片中銀杏總黃酮的含量

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1、高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方銀杏葉片中銀杏總黃酮的含量【摘要】目的建立復(fù)方銀杏葉片中銀杏總黃酮含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法，用SymmetryC18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)，以甲醇0.4%磷酸溶液（52∶48）為流動(dòng)相，流速為1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)360nm，柱溫35℃。結(jié)果該法線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為98.35%,　RSD為1.17%(n=5)。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便，分離效果好，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可作為復(fù)方銀杏葉片的質(zhì)量控制方法。【關(guān)鍵詞】復(fù)方銀杏葉片；黃酮；槲皮素；山柰素；異鼠李素；高效液相色譜法　　Abstract：ObjectiveTo

2、establishthedeterminationmethodofflavonoidsinpoundGinkgobilobaLeavesTablets.MethodsTheanalysisedonaSymmetryC18column（4.6mm×250mm,5μm）ethanol0.4%phosphoricacid(52:48)asmobilephaseataflol·min-1,andatacolumntemperatureof35℃.Thedetection.ResultsThelinearityofthismethodplesethodisconvientination

3、offlavonoidsandcanbeusedtoevaluatethequalityofpoundGinkgobilobaLeavesTablets.　　Keypferol；Isorhamin；HPLC　　復(fù)方銀杏葉片是由銀杏葉提取物和廣西野葛根提取物等制成的復(fù)方制劑，具有活血化淤，降低血脂，清除自由基和抗衰老等功效和作用［1］。銀杏葉中所含的槲皮素、山柰素、異鼠李素等黃酮化合物為其主要有效成分之一。銀杏葉中黃酮化合物的測(cè)定方法很多，如導(dǎo)數(shù)光譜法［2］，近紅外光譜法［3］，分光光度法［4］，示波極譜法［5］，熒光光度法［6］，庫(kù)侖滴定法［7］，毛細(xì)管電泳法［8］和高效液相色譜

4、法［9］等。而有關(guān)銀杏葉和野葛根兩者配方制劑中銀杏總黃酮含量測(cè)定方法尚未見報(bào)道。本文采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方銀杏葉片中槲皮素、山柰素、異鼠李素等黃酮化合物的含量，方法快速簡(jiǎn)便，分離效果良好，專屬性強(qiáng)。可用于復(fù)方銀杏葉片的質(zhì)量控制?！　?儀器與試藥　　1.1儀器美國(guó)PerKinElmer公司Series200高效液相色譜儀（包括Series200紫外檢測(cè)器、Series200二元泵、600Series接口及色譜工作站）?！　?.2試藥槲皮素、山奈素、異鼠李素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為10081200406，110861200405，110860200407）

5、。復(fù)方銀杏葉片為本課題組在廣西科技廳三項(xiàng)基金資助下研制的新產(chǎn)品。甲醇為色譜純，水為高純水，磷酸為分析純?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件　SymmetryC18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm，美國(guó)l·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)360nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量20μl?！　?.2溶液制備　　2.2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過(guò)夜的槲皮素、山柰素、異鼠李素對(duì)照品適量（15.6，17.0，10.0mg）置100ml量瓶中，加甲醇微熱使溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用?！　?.2.2供試品溶液的制備　取本品10片，除去包衣，研細(xì)，精密稱取適量（約含銀杏總黃酮醇苷19.2m

6、g），置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10ml，置100ml錐形瓶中，加甲醇10ml、25%鹽酸溶液5ml，搖勻，置水浴中加熱回流30min，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得?！　?.2.3陰性對(duì)照溶液的制備取處方中除銀杏葉提取物以外的其余藥材和輔料，按規(guī)定工藝制備成片劑后，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液?！　?.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取上述對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml

7、，分別置10ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，各進(jìn)樣20μl，按上述色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品濃度C（μg·ml-1）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如下：　　槲皮素：A=80074C-52255，r=0.9994，線性范圍為15.6～78.0μg·ml-1　　山柰素：A=63168C+35558，r=0.9982，線性范圍為17.0～85.0μg·ml-1　　異鼠李素：A=60465C+20840，r=0.9996，線性范圍為10.0～50.0μg·ml-1　　2