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《乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及熒光鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第28卷第5期新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)Vol．28No．52011年9月JournalofXinxiangMedicalCollegeSep．2011·541·氉欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉欁欁本文引用:辛毅，許秀芳，黃益民，等．乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及熒光鑒定［J］．新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，28(5):541-欁欁氉547．欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁欁氉乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞
2、和心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及熒光鑒定12213辛毅，許秀芳，黃益民，張穎，李溫斌(1．首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院北京市心肺血管疾病研究所實(shí)驗(yàn)中心，北京100029;2．首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院北京市心肺血管疾病研究所分子生物學(xué)研究室，北京100029;3．首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院心外科，北京100029)摘要:目的探討和建立適用于乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)及鑒定的技術(shù)方法。方法乳小鼠心臟剪成組織塊，用Ⅱ型膠原酶加胰蛋白酶聯(lián)合消化法分離細(xì)胞，再通過差速貼壁分離法分別收集、培養(yǎng)乳小鼠心肌
3、成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞。光學(xué)顯微鏡下分別觀察成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞的基本形態(tài)特征的變化，并對(duì)2種細(xì)胞行蘇木素-伊紅(HE)染色，用第2代心肌成纖維細(xì)胞行波形蛋白免疫熒光鑒定，而原代心肌細(xì)胞行α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白、心肌肌鈣蛋白和心肌肌球蛋白重鏈免疫熒光鑒定。結(jié)果差速貼壁分離法心肌成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)90min基本貼壁，貼壁較早，培養(yǎng)第3～5代細(xì)胞生長(zhǎng)良好，72h心肌成纖維細(xì)胞波形蛋白免疫熒光鑒定純度高達(dá)97%;而心肌細(xì)胞貼壁較晚，24h貼壁后部分心肌細(xì)胞出現(xiàn)自發(fā)性搏動(dòng)現(xiàn)象，48h后細(xì)胞逐漸展開，72h后逐漸形成細(xì)胞
4、簇并出現(xiàn)同步搏動(dòng)，心肌肌球蛋白重鏈、心肌橫紋肌肌動(dòng)蛋白、心肌肌鈣蛋白免疫熒光鑒定心肌細(xì)胞純度分別為95%、93%、95%。結(jié)論差速貼壁分離法結(jié)合免疫熒光鑒定可分離乳小鼠心肌成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞，此方法成熟、穩(wěn)定、有效，為研究心臟疾病的基礎(chǔ)與臨床研究提供了理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。關(guān)鍵詞:心肌成纖維細(xì)胞;心肌細(xì)胞;原代培養(yǎng);乳小鼠;免疫熒光中圖分類號(hào):Q95-33;Q2-33文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1004-7239(2011)05-0541-07Isolation，primarycultureandidentifi
5、cationofcardiacfibroblastsandcardiacmyocytesofneonatalmouse12213XINYi，XUXiu-fang，HUANGYi-min，ZHANGYing，LIWen-bin(1．BeijingAnzhenHospital，CapitalMedicalUniversity，DepartmentofExperimentalCenter，BeijingInstituteofHeart，LungandBloodVesselDiseases，Beijing1000
6、29，China;2．BeijingAnzhenHospital，CapitalMedicalUniversity，DepartmentofMolecularBiology，BeijingInstituteofHeart，LungandBloodVesselDiseases，Beijing100029，China;3．DepartmentofCardiacSurgery，BeijingAnzhenHospital，AffiliatedtoCapitalMedicalUniversity，Beijing10
7、0029，China)Abstract:ObjectiveTobuildtheisolation，cultureandidentificationtechniquesofcardiacfibroblastsandcardiacmyocytesofneonatemouse．MethodsTheheartofneonatemousewascutintopieces，thentypeⅡcollagenaseplustrypsi-nasedigestionmethodwereusedforisolatingcel
8、landthencardiacfibroblastsandcardiacmyocyteswerecollectedandculturedbydifferentspeedadherence．Thebasicshapechangeofcardiacfibroblastsandcardiacmyocyteswereobservedundertheopit-icalmicroscopeandthetwokindscellsweregi
