染料木黃酮對帕金森病模型小鼠多巴胺能神經元的保護作用論文

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1、染料木黃酮對帕金森病模型小鼠多巴胺能神經元的保護作用論文楊延東高全桂陳文芳【摘要】目的探討染料木黃酮對1甲基4苯基1,2,3,6四氫吡啶（MPTP）制備的帕金森病（PD）模型小鼠多巴胺能神經元的保護作用。方法將C57BL6雄性小鼠隨機分為正常對照組、MPTP模型組及染料木黃酮預處理組。用逆轉錄聚合酶鏈式反應（RTPCR）技術檢測黑質酪氨酸羥化酶（TH）及多巴胺轉運體(DAT)基因的表達水平。應用高效液相色譜法檢測紋狀體（Str）內DA及其代謝物二羥基苯乙酸（DOPAC）含量。結果MPTP模型組黑質TH和DAT基因的表達較正常對照組明顯降低，染料木黃酮預處理組可逆轉上述改

2、變（F=20.31、13.19,P0.01)。MPTP模型組Str內DA及其代謝產物DOPAC的含量較對照組明顯減少，應用染料木黃酮后可逆轉上述改變(F=63.58、16.12,P0.01)。結論染料木黃酮對MPTP制備的PD模型小鼠黑質紋狀體DA能神經元有明顯的保護作用?！娟P鍵詞】帕金森病染料木黃酮1甲基4苯基1236四氫吡啶黑質紋狀體［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofgenisteinondoparminergicneurons.MethodsC57BL6micelydividedintothreegroup

3、s:controlgroup(DMSO,ip),MPTPgroup(15mg/kg,ip)andgenisteinpretreatment(10mg/kg,ip)group.Thechangesoftyrosinehydroxylase(TH)anddopaminetransport(DAT)geneexpressioninsubstantianigra(SN)erasechainreaction(RTPCR).ThecontentsofDAanditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOPAC)inedbyhighperformanc

4、eliquidchromatographyelectricalchemicaldetection(HPLCECD).ResultsGenisteinpretreatmentcouldpreventtheMPTPinduceddecreaseofTHandDATgeneexpression(F=20.31,13.19;P0.01).MPTPsignificantlydecreasedthelevelsofdopamine(DA)anditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOPAC)inthestriatum,ent(F=63.58,16

5、.12;P0.01).ConclusionGenisteinhasneuroprotectiveeffectsondopaminergicneuronsagainstMPTPinducedmousemodelofPD.［KEYEGA公司產品；TagDNA聚合酶為TAKARA公司產品。1.2實驗動物造模與給藥實驗動物隨機分為正常對照組、MPTP模型組和染料木黃酮預處理組，每組6只。3組動物每天8：00時先行腹腔注射二甲基亞砜（DMSO)或染料木黃酮(10mg/kg)，連續(xù)3d；MPTP模型組于第4天注射DMSO后2h開始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，連續(xù)注射4次，每次間隔2h，

6、自第5天開始繼續(xù)腹腔注射DMSO，連續(xù)4d；染料木黃酮預處理組于第4天注射染料木黃酮后2h開始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，連續(xù)注射4次，每次間隔2h，自第5天開始繼續(xù)腹腔注射染料木黃酮，連續(xù)4d。1.3RTPCR檢測末次注射24h后斷頭取腦，快速取雙側SN，加TRIzol試劑提取總RNA?？俁NA經紫外線分光光度計定量后,參照試劑盒說明書建立20μLRT反應體系：取3μg總RNA加5mmol/LMgCl24μL、10×逆轉錄反應緩沖液2μL，1mmol/LdNTP各2μL，AMV逆轉錄酶15U0.5μL，RNaseInhibitor0.5μL，Olig（dT）15引物1μL

7、，加無RNase水至20μL，42℃反應1h，99℃加熱5min，然后快速冷卻到4℃。反轉錄得到的cDNA用作PCR反應模板，或暫放-20℃保存。建立25μLPCR反應體系：在3μgRT產物中加入25mmol/LMgCl21.5μL，10×逆轉錄反應緩沖液2.5μL，dNTP各2μL,上下游引物各1μL，TaqDNA聚合酶0.2μL，加無RNase水至25μL。TH基因上游引物序列：5′AAAATCCACCACTTAGAGACC3′，下游引物序列：5′