染料木黃酮對帕金森病模型小鼠多巴胺能神經(jīng)元的保護作用論文

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1、染料木黃酮對帕金森病模型小鼠多巴胺能神經(jīng)元的保護作用論文楊延東高全桂陳文芳【摘要】目的探討染料木黃酮對1甲基4苯基1,2,3,6四氫吡啶（MPTP）制備的帕金森?。≒D）模型小鼠多巴胺能神經(jīng)元的保護作用。方法將C57BL6雄性小鼠隨機分為正常對照組、MPTP模型組及染料木黃酮預處理組。用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)（RTPCR）技術(shù)檢測黑質(zhì)酪氨酸羥化酶（TH）及多巴胺轉(zhuǎn)運體(DAT)基因的表達水平。應(yīng)用高效液相色譜法檢測紋狀體（Str）內(nèi)DA及其代謝物二羥基苯乙酸（DOPAC）含量。結(jié)果MPTP模型組黑質(zhì)TH和DAT基因的表達較正常對照組明顯降低，染料木黃酮預處理組可逆轉(zhuǎn)上述改

2、變（F=20.31、13.19,P0.01)。MPTP模型組Str內(nèi)DA及其代謝產(chǎn)物DOPAC的含量較對照組明顯減少，應(yīng)用染料木黃酮后可逆轉(zhuǎn)上述改變(F=63.58、16.12,P0.01)。結(jié)論染料木黃酮對MPTP制備的PD模型小鼠黑質(zhì)紋狀體DA能神經(jīng)元有明顯的保護作用?！娟P(guān)鍵詞】帕金森病染料木黃酮1甲基4苯基1236四氫吡啶黑質(zhì)紋狀體［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofgenisteinondoparminergicneurons.MethodsC57BL6micelydividedintothreegroup

3、s:controlgroup(DMSO,ip),MPTPgroup(15mg/kg,ip)andgenisteinpretreatment(10mg/kg,ip)group.Thechangesoftyrosinehydroxylase(TH)anddopaminetransport(DAT)geneexpressioninsubstantianigra(SN)erasechainreaction(RTPCR).ThecontentsofDAanditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOPAC)inedbyhighperformanc

4、eliquidchromatographyelectricalchemicaldetection(HPLCECD).ResultsGenisteinpretreatmentcouldpreventtheMPTPinduceddecreaseofTHandDATgeneexpression(F=20.31,13.19;P0.01).MPTPsignificantlydecreasedthelevelsofdopamine(DA)anditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOPAC)inthestriatum,ent(F=63.58,16

5、.12;P0.01).ConclusionGenisteinhasneuroprotectiveeffectsondopaminergicneuronsagainstMPTPinducedmousemodelofPD.［KEYEGA公司產(chǎn)品；TagDNA聚合酶為TAKARA公司產(chǎn)品。1.2實驗動物造模與給藥實驗動物隨機分為正常對照組、MPTP模型組和染料木黃酮預處理組，每組6只。3組動物每天8：00時先行腹腔注射二甲基亞砜（DMSO)或染料木黃酮(10mg/kg)，連續(xù)3d；MPTP模型組于第4天注射DMSO后2h開始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，連續(xù)注射4次，每次間隔2h，

6、自第5天開始繼續(xù)腹腔注射DMSO，連續(xù)4d；染料木黃酮預處理組于第4天注射染料木黃酮后2h開始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，連續(xù)注射4次，每次間隔2h，自第5天開始繼續(xù)腹腔注射染料木黃酮，連續(xù)4d。1.3RTPCR檢測末次注射24h后斷頭取腦，快速取雙側(cè)SN，加TRIzol試劑提取總RNA?？俁NA經(jīng)紫外線分光光度計定量后,參照試劑盒說明書建立20μLRT反應(yīng)體系：取3μg總RNA加5mmol/LMgCl24μL、10×逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)緩沖液2μL，1mmol/LdNTP各2μL，AMV逆轉(zhuǎn)錄酶15U0.5μL，RNaseInhibitor0.5μL，Olig（dT）15引物1μL

7、，加無RNase水至20μL，42℃反應(yīng)1h，99℃加熱5min，然后快速冷卻到4℃。反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA用作PCR反應(yīng)模板，或暫放-20℃保存。建立25μLPCR反應(yīng)體系：在3μgRT產(chǎn)物中加入25mmol/LMgCl21.5μL，10×逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)緩沖液2.5μL，dNTP各2μL,上下游引物各1μL，TaqDNA聚合酶0.2μL，加無RNase水至25μL。TH基因上游引物序列：5′AAAATCCACCACTTAGAGACC3′，下游引物序列：5′