依曲替酸對角質(zhì)形成細胞肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子mrna的影響論文

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1、依曲替酸對角質(zhì)形成細胞肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子mRNA的影響論文羅素菊，彭振輝，鄭焱，張路坤，王蔚，王國榮【摘要】目的研究依曲替酸對培養(yǎng)的正常人角質(zhì)形成細胞(KC)增殖和肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子(HBEGF)mRNA表達的影響。方法0.1和1μmol/L伊曲替酸處理正常人KC12h后，用噻唑藍比色法(MTT法)和實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RTPCR)法分別檢測KC增殖和HBEGFmRNA表達的改變。結(jié)果依曲替酸處理12h后，可劑量依賴抑制KC的增殖和上調(diào)HBEGFmRNA的表達。0.1和1μmol

2、/L伊曲替酸分別使KC增殖抑制10.2%和14.4%.freelRNA增加到正常對照組的3.2和7.1倍。與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論依曲替酸可劑量依賴上調(diào)HBEGFmRNA的表達，其可能參與依曲替酸對KC增殖的抑制作用?！娟P(guān)鍵詞】表皮生長因子；角質(zhì)形成細胞；維甲酸EffectofacitretinininducingtheexpressionofheparinbindingepidermalgroRNAinnormalhumankeratinocytesABSTRACT:ObjectiveT

3、oinvestigatethealterationofcellproliferationandheparinbindingepidermalgroRNAexpressioninculturednormalhumankeratinocytesafteracitretintreatment.MethodsAftera12hourincubationol/Lacitretininnormalhumankeratinocytes,theproliferationpotencyofthecellsetricassayandth

4、eexpressionofHBEGFmRNAinedbyrealtimequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).ResultsBothkeratinocytesgroRNAexpressionentol/Lacitretininhibitedkeratinocyteproliferationby10.2%and14.4%,andelevatedHBEGFmRNAby3.2and7.1fold,respectively.Conc

5、lusionUpregulatedHBEGFmRNAexpressioninducedbyacitretininnormalhumankeratinocytesmaybeinvolvedinregulatingkeratinocytegroent.KEY)、低糖DMEM、Dispase酶均購于Gibco公司，依曲替酸為重慶華邦制藥股份有限公司惠贈，TRIzol試劑購于Invitrogen公司，RTPCR試劑盒購于Fermentas公司，SYBRgreen2×PCR混合液購于ABI公司，PCR配套試劑購于TaKaRa公司

6、，GeneAmp9700PCR儀和PRISM7900PCR儀均為ABI公司產(chǎn)品。1.2原代KC的培養(yǎng)取健康人環(huán)切術(shù)后包皮，消毒液浸泡后，置于2.5g/LDispase酶4℃消化過夜。次日分離表、真皮，將表皮置于2.5g/L胰酶與0.2g/LEDTA(1∶1)混合液中，消化10min，用含100mL/L胎牛血清的DMEM終止消化，吹打后，100目篩網(wǎng)過濾，離心收集細胞，加入KCSFM，接種入培養(yǎng)瓶，于37℃、50mL/LCO2條件下培養(yǎng)，次日更換新培養(yǎng)基，以后每3d換液一次，取3-5代細胞進行實驗5。將實驗細胞傳代入6孔培

7、養(yǎng)板中，當細胞90%融合時，進行干預處理，繼續(xù)培養(yǎng)12h。每組設(shè)3個孔，并設(shè)置未處理的正常對照組。1.3MTT法檢測細胞的增殖將處于對數(shù)生長期的細胞接種于96孔培養(yǎng)板，加入含0.1或1μmol/L依曲替酸的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)12h。設(shè)空白對照組(只加細胞培養(yǎng)液，無細胞)。吸出培養(yǎng)液，每孔中加入MTT(5mg/mL)后再孵育4h，棄上清液后每孔加入二甲基亞砜150μL，振蕩10min。以空白對照組為基準，在490nm波長處檢測吸光度值。生長抑制率(%)=1-A490nm(實驗組細胞)/A490nm(對照組細胞)×100%。1.

8、4總RNA的提取和cDNA的合成按10cm2(培養(yǎng)瓶面積)加入1mLTRIzoL提取總RNA，操作嚴按試劑盒說明進行。用12g/L瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA的完整性，用紫外分光光度計測RNA含量和純度。cDNA的合成操作嚴格按試劑盒說明進行。1.5實時熒光定量RTPCR檢測HBEGFmRNA的表達用1