葛粉中葛根素高效液相色譜研究

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1、葛粉中葛根素高效液相色譜研究提要:目的:測定葛粉中葛根素的含量。方法:用HPLC法測定,以MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)為流動相,250nm為檢測波長。結(jié)果:葛根素呈良好的線性關(guān)系,平均回收率為98.6%,RSD為1.76%。結(jié)論:該法簡單、快速、準(zhǔn)確。關(guān)鍵詞:葛粉;葛根素;HPLCStudy0fPuerariainPuerariaPowderbyReversed-phaseHighPerformanceLiquidChromatographyLIHong-yu,DAIShi-wen,SHOUDian,ZHANGJi

2、an-min,YUZhong-ming(ZhejiangAcademyofTraditionalChineseMedicine,Hangzhou310017,China)Abstract:Object:DeterminationofPuerariainPuerariaPowderMethods:PuerariaweredeterminedbyHPLC.ThemobilephasewasMeOH-H2O-HAc(30:70:0.5).Detectionwavelengthwasat250nm.Results:Puerariashowe

3、dagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.6%andRSDwas1.76%.Conclusion:Thismethodwassimple,quickandaccurate.5Keywords:PuerariaPowder;Pueraria;HPLC葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱,生津,透疹,升陽止瀉功效,用于外感發(fā)熱頭痛、項背強痛,口渴,消渴,麻疹不透,熱痢,泄瀉,高血壓頸項強痛等[1]?,F(xiàn)代研究證實,

4、葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物,具有抗炎解熱、擴(kuò)張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用,同時也有降低血壓的作用。有關(guān)葛根中葛根素等異黃酮的含量測定研究已有不少報道[2-5],但對葛粉中葛根素含量測定報道不多。本文對葛粉中葛根素的提取條件和測試條件等進(jìn)行比較研究,并采用高效液相色譜法對葛粉樣品進(jìn)行了定量分析,結(jié)果令人滿意。1實驗部分1.1儀器與試劑島津LC-10Atvp高效液相色譜儀;SPD-10Avp紫外檢測器;島津UV-265紫外分光光度儀,多功能榨汁機(jī)/攪拌機(jī)SG300-I(上海科駿電器有限公司)。甲醇(色譜純)

5、,水(二次蒸餾),其余均為分析純。葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所);鮮葛(浙江省永嘉縣潘坑鄉(xiāng))。1.2色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;色譜柱C18diamonsil5ul(150×4.6mm5I.D),MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)為流動相,紫外檢測波長250nm。2結(jié)果與討論2.1提取溶劑濃度的選擇精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml,超聲提取60分鐘,進(jìn)樣5ul,比較峰面積,實驗結(jié)果表明30%乙醇提取最好。2.2超聲提取時間的選擇精密稱取同一樣品約0.1g,分

6、別加30%乙醇10ml,超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘,進(jìn)樣5ul,比較峰面積,實驗結(jié)果表明超聲60分鐘為最佳提取條件。2.3流動相及流速的選擇試驗時曾采用下述流動相進(jìn)行測定:甲醇-水(25:75)、甲醇-水-醋酸(30:70:0.5)、甲醇-水(30:70)為流動相,結(jié)果采用甲醇-水-冰醋酸(30:70:0.5)為流動相,樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。2.4標(biāo)樣溶液的制備稱取一定量葛根素對照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標(biāo)準(zhǔn)液。2.5葛粉制備取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機(jī)內(nèi)

7、,攪拌三次,每次1分鐘,每次加水200ml,5150ml,100ml,合并漿汁放置二天,去掉上面的水,下面的粉漿用定量濾紙過濾,低溫干燥,放入干燥器中備用。2.6供試品溶液制備精確稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過濾,濾液過0.45um濾膜作為供試品溶液。2.7線性關(guān)系考察在上述色譜條件下,分別進(jìn)標(biāo)樣溶液0.5、3、5、7、10μl,測得各峰面積。以葛根素為橫座標(biāo)(A),以峰面積(Y)為縱座標(biāo),計算得回歸方程:Y=3.90×106x+728.14,相關(guān)系數(shù)r=0.9999;結(jié)果紫外檢測葛根素

8、在0.0065-0.13μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。2.8精密度試驗取上述標(biāo)樣溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,測定,RSD為1.11%。2.9重復(fù)性試驗取同一樣品重復(fù)測定5次,RSD為1.61%。2.10穩(wěn)定性試驗取上述供試品溶液,0、2、5、7、

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