葛粉中葛根素高效液相色譜研究

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1、葛粉中葛根素高效液相色譜研究提要:目的:測(cè)定葛粉中葛根素的含量。方法:用HPLC法測(cè)定,以MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)為流動(dòng)相,250nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果:葛根素呈良好的線性關(guān)系,平均回收率為98.6%,RSD為1.76%。結(jié)論:該法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確。關(guān)鍵詞:葛粉;葛根素;HPLCStudy0fPuerariainPuerariaPowderbyReversed-phaseHighPerformanceLiquidChromatographyLIHong-yu,DAIShi-wen,SHOUDian,ZHANGJi

2、an-min,YUZhong-ming(ZhejiangAcademyofTraditionalChineseMedicine,Hangzhou310017,China)Abstract:Object:DeterminationofPuerariainPuerariaPowderMethods:PuerariaweredeterminedbyHPLC.ThemobilephasewasMeOH-H2O-HAc(30:70:0.5).Detectionwavelengthwasat250nm.Results:Puerariashowe

3、dagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.6%andRSDwas1.76%.Conclusion:Thismethodwassimple,quickandaccurate.5Keywords:PuerariaPowder;Pueraria;HPLC葛根為豆科植物野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱,生津,透疹,升陽(yáng)止瀉功效,用于外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛,口渴,消渴,麻疹不透,熱痢,泄瀉,高血壓頸項(xiàng)強(qiáng)痛等[1]?,F(xiàn)代研究證實(shí),

4、葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物,具有抗炎解熱、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管、增加冠狀動(dòng)脈血流量的作用,同時(shí)也有降低血壓的作用。有關(guān)葛根中葛根素等異黃酮的含量測(cè)定研究已有不少報(bào)道[2-5],但對(duì)葛粉中葛根素含量測(cè)定報(bào)道不多。本文對(duì)葛粉中葛根素的提取條件和測(cè)試條件等進(jìn)行比較研究,并采用高效液相色譜法對(duì)葛粉樣品進(jìn)行了定量分析,結(jié)果令人滿意。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與試劑島津LC-10Atvp高效液相色譜儀;SPD-10Avp紫外檢測(cè)器;島津UV-265紫外分光光度儀,多功能榨汁機(jī)/攪拌機(jī)SG300-I(上??乞E電器有限公司)。甲醇(色譜純)

5、,水(二次蒸餾),其余均為分析純。葛根素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);鮮葛(浙江省永嘉縣潘坑鄉(xiāng))。1.2色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;色譜柱C18diamonsil5ul(150×4.6mm5I.D),MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)為流動(dòng)相,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)250nm。2結(jié)果與討論2.1提取溶劑濃度的選擇精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml,超聲提取60分鐘,進(jìn)樣5ul,比較峰面積,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明30%乙醇提取最好。2.2超聲提取時(shí)間的選擇精密稱取同一樣品約0.1g,分

6、別加30%乙醇10ml,超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘,進(jìn)樣5ul,比較峰面積,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明超聲60分鐘為最佳提取條件。2.3流動(dòng)相及流速的選擇試驗(yàn)時(shí)曾采用下述流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定:甲醇-水(25:75)、甲醇-水-醋酸(30:70:0.5)、甲醇-水(30:70)為流動(dòng)相,結(jié)果采用甲醇-水-冰醋酸(30:70:0.5)為流動(dòng)相,樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。2.4標(biāo)樣溶液的制備稱取一定量葛根素對(duì)照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標(biāo)準(zhǔn)液。2.5葛粉制備取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機(jī)內(nèi)

7、,攪拌三次,每次1分鐘,每次加水200ml,5150ml,100ml,合并漿汁放置二天,去掉上面的水,下面的粉漿用定量濾紙過(guò)濾,低溫干燥,放入干燥器中備用。2.6供試品溶液制備精確稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過(guò)濾,濾液過(guò)0.45um濾膜作為供試品溶液。2.7線性關(guān)系考察在上述色譜條件下,分別進(jìn)標(biāo)樣溶液0.5、3、5、7、10μl,測(cè)得各峰面積。以葛根素為橫座標(biāo)(A),以峰面積(Y)為縱座標(biāo),計(jì)算得回歸方程:Y=3.90×106x+728.14,相關(guān)系數(shù)r=0.9999;結(jié)果紫外檢測(cè)葛根素

8、在0.0065-0.13μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。2.8精密度試驗(yàn)取上述標(biāo)樣溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,測(cè)定,RSD為1.11%。2.9重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品重復(fù)測(cè)定5次,RSD為1.61%。2.10穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述供試品溶液,0、2、5、7、

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