第25章 病毒感染的檢查方法與防治原則

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1、病毒感染的檢查方法與防治原則中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院姚孟暉副教授第25章第一節(jié)病毒感染的檢查病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理2.低溫保存，盡快送檢3.血清學(xué)診斷采雙份血清二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）雞胚接種（egginoculation）動(dòng)物接種（animalinoculation）二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰

2、性病毒鑒定盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性（一）病毒的分離培養(yǎng)1.細(xì)胞培養(yǎng)單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）分類懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織組織塊分散的單個(gè)細(xì)胞單層細(xì)胞剪碎培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感②生長(zhǎng)能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)(2)二倍

3、體細(xì)胞培養(yǎng)體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感②不帶異種蛋白(人源性)③不帶病毒，無致瘤潛能④可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：①對(duì)多種病毒敏感性高②繁殖能力高，傳代時(shí)間長(zhǎng)③有致癌危險(xiǎn)，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)2.雞胚培養(yǎng)采用孵化9～14天的雞胚絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）嗜神經(jīng)病毒2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生

4、物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜3.動(dòng)物接種應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒1．病毒增殖鑒定(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鑒定①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染

5、細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)?？刹《荆伺吣I細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？?？刹《綜PE(-)—風(fēng)疹病毒(+)?？刹《?-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)埃可病毒(+)(4)細(xì)胞代謝改變細(xì)胞代謝變慢p

6、H變化減慢2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大3.病毒血清學(xué)鑒定鑒定病毒種、型、亞型(1)血凝抑制試驗(yàn)（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集（血凝抑制試驗(yàn)）(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(gelimmuno-diffusiontest)——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定4.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基

7、因測(cè)序（三）病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗(yàn)（plaqueformationtest）3.50％組織細(xì)胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量(四)新病毒的鑒定核酸類型的測(cè)定理化性狀的檢測(cè)形態(tài)學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定基因測(cè)序和生物對(duì)比三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等1.中和試驗(yàn)（neutralizingt