病毒感染的檢查方法與防治原則

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1、第25章病毒感染的檢查方法與防治原則講授陳利玉內(nèi)容第一節(jié)病毒感染的診斷(檢查方法）第二節(jié)病毒感染的特異性預防(自學）第三節(jié)病毒感染的治療（自學）第一節(jié)病毒感染的診斷（Diagnosisofviralinfection）?標本采集與送檢原則?病毒感染的檢查方法一、標本采集與送檢原則?按疾病種類與病程采取不同標本?在發(fā)病早期與用藥之前采取標本?無菌操作，有菌標本用“雙抗”（青、鏈霉素）或“三抗”（青、鏈霉素+兩性霉素B）處理?冷藏速送，病變組織用50％甘油保存?血清學檢測：IgM—單份血清,IgG—雙份血清二、檢

2、查方法?病毒的形態(tài)學檢查?病毒的血清學檢查?病毒的分子生物學檢查?病毒的分離培養(yǎng)與鑒定1.病毒形態(tài)學檢查電子顯微鏡：可觀察各種病毒的形態(tài)但設備貴、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可觀察大病毒（痘病毒）和包涵體對一般病毒檢測意義不大呼腸病毒感染回腸上皮細胞電鏡照片ElectronmicrographsInclusionbodyCytomegaliccellthatcontainsadense,"owl'seye,"acidophilicintranuclearinclusionbodyNegrybody2.病毒血

3、清學檢查?已知抗原—測抗體（診斷）?已知抗體—測抗原（鑒定病毒屬、種、型、亞型）(1)中和試驗(Neutralizationtest)(2)血凝抑制試驗(Hemagglutinationinhibitiontest)(3)免疫標記法(FIA、EIA、RIA)⑷蛋白印跡(Westernblot)2.病毒血清學檢查方法：ImmunofluorescensetestImmunofluorescensetestPositiveimmunofluorescencetestforrabiesvirusantigen.(S

4、ource:CDC)HEL細胞中CMVIE1蛋白的表達Enzymeimmunoassay(EIA)ELISAColouredwellsindicatereactivityAIDS的確診試驗Westernblot3.病毒分子生物學檢查?可用于檢測常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)不能培養(yǎng)的病毒?可用于檢測少量標本或含少量病毒的標本?可用于抗體產(chǎn)生前或不能產(chǎn)生抗體的免疫缺陷患者檢測?可對病毒進行定量檢測，有助于療效監(jiān)測?可對病毒進行基因分型?靈敏度高、特異性好、快速、簡捷優(yōu)點：3.病毒分子生物學檢查?核酸電泳(nucleicacide

5、lectrophoresis)?核酸雜交(nucleicacidhybridization)?核酸擴增(PCR）?基因芯片(genechip)?基因測序(genesequence)方法：4.病毒的分離培養(yǎng)與鑒定:?病毒的分離培養(yǎng)?病毒的鑒定?病毒數(shù)量及感染性測定病毒的分離培養(yǎng)方法：?動物接種?雞胚培養(yǎng)?細胞培養(yǎng):⑴動物接種(animalinoculation)動物：鼠、兔、猴、黑猩猩等優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高、動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒。目前已很少應用。⑵雞胚培養(yǎng)(embryo

6、natedeggculture)受精卵孵育10-12天雞胚接種病毒孵育2-7天收獲相應的材料進行鑒定雞胚接種部位：尿囊腔接種絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種優(yōu)點：易管理不帶微生物成本較低缺點：操作程序復雜目前用雞胚培養(yǎng)的病毒主要是流感病毒⑵雞胚培養(yǎng)(embryonatedeggculture)(3)細胞培養(yǎng)(cellculture)根據(jù)細胞生長的方式分:?單層細胞培養(yǎng)（monolayercellculture）?懸浮細胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）根據(jù)細胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)分:?

7、原代培養(yǎng)細胞?二倍體細胞株?傳代細胞系或株(3)細胞培養(yǎng)(cellculture)①原代培養(yǎng)細胞（primaryculturalcells)組織組織塊分散的單個細胞單層細胞剪碎蛋白酶(原代細胞)單層細胞(次代細胞)傳代培養(yǎng)培養(yǎng)基①原代培養(yǎng)細胞（primaryculturalcells)epithelialcells特點:?對多種病毒敏感?生長能力有限,獲取成本高?可攜帶潛伏病毒應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?不能用于制備疫苗①原代培養(yǎng)細胞（primaryculturalcells)體外分裂50~100

8、代仍保持二倍染色體數(shù)目的單型細胞特點:?對多種病毒敏感?不帶異種蛋白(人源性)?不帶病毒,無致瘤潛能應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?制備疫苗②二倍體細胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells③傳代細胞系(continuouscellline)特點:?對多種病毒敏感性高?繁殖能力強,傳代時間長?有致癌危險(來源于癌細胞或突變的二倍體細胞株)應用:?病毒分離與