阿司匹林藥物的高效液相色譜法測(cè)定

《阿司匹林藥物的高效液相色譜法測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、實(shí)驗(yàn)四阿司匹林藥物的高效液相色譜法測(cè)定[目的要求]1、了解高效液相色譜法分離有機(jī)化合物的基本原理及操作條件；2、掌握高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及作用；3、了解HPLC法測(cè)定阿司匹林藥片中水楊酸的方法。[基本原理]高效液相色譜法是20世紀(jì)70年代急劇發(fā)展起來的一項(xiàng)高效、快速的分離分析技術(shù)。液相色譜法是指流動(dòng)相為液體的色譜技術(shù)。在經(jīng)典的液體柱色譜法基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜法的理論基礎(chǔ)，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快，分離效率高和操作自動(dòng)化。這種柱色譜技術(shù)稱做高效液相色譜法。它可用來作液固吸附，液液分配

2、，離子交換和空間排阻色譜（即凝膠滲透色譜）分析，應(yīng)用非常廣泛。據(jù)估計(jì)，世界上幾百萬種化合物中除20%宜用氣相色譜(GC)分離分析外，其余80%的化合物，包括大(高)分子化合物、離子型化合物、熱不穩(wěn)定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC(正相HPLC、反相HPLC、離子交換色譜和離子色譜、體積排除色譜、親合色譜等等)進(jìn)行分離分析。而且高效液相色譜法還具有以下幾個(gè)突出的特點(diǎn)：（1）分離效能高由于新型高效微粒固體相填料的使用，液相色譜填充柱的柱效可達(dá)5000~30000塊/m理論塔板數(shù)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣相色譜填充柱的100

3、0塊/m理論塔板數(shù)的柱效；（2）選擇性高由于液相色譜具有高柱效，并且流動(dòng)相可以控制和改善分離過程的選擇性，因此高效液相色譜不僅可以分析不同類型的有機(jī)化合物及其同分異構(gòu)體，還可以分析在性質(zhì)上極為相似的旋光異構(gòu)體；（3）檢測(cè)靈敏度高高效液相色譜法使用的檢測(cè)器大多數(shù)都具有較高的靈敏度，紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)10-9g，熒光檢測(cè)器靈敏度可達(dá)10-12g；（4）分析速度快由于高壓泵的使用，相對(duì)于經(jīng)典液相（柱）色譜法其分析時(shí)間大大縮短。高效液相色譜儀器系統(tǒng)的主要部件:儲(chǔ)液罐、高壓輸液泵、進(jìn)樣裝置、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀和數(shù)據(jù)處理裝置（色譜工作

4、站）：(1)輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)要為HPLC儀器提供流量恒定、準(zhǔn)確、無脈沖的流動(dòng)相，流量的精度和長(zhǎng)期的重復(fù)性要好，同時(shí)還要提供精度好、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好的多元溶劑梯度。流量的范圍要寬，既能滿足微柱(內(nèi)徑l~2mm)分析，也能滿足常規(guī)柱(內(nèi)徑4mm)分析，甚至還可滿足半制備柱(內(nèi)徑10mm)的需求。目前HPLC常用的是雙泵頭往復(fù)式柱塞泵，流速范圍一般為0.001-10ml/min。(2)色譜柱色譜柱通常為不銹鋼柱，內(nèi)裝各種填充劑。常用的填料為硅膠，可用于反相色譜；化學(xué)鍵合固定相，根據(jù)鍵合的基團(tuán)不同，可用于反相或正相色譜。其中最常用的是

5、十八烷基鍵合硅膠，即ODS柱，可用于反相色譜或離子對(duì)色譜。(3)檢測(cè)器檢測(cè)器用于連續(xù)檢測(cè)色譜柱流出的物質(zhì)，進(jìn)行定性定量分析。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩(wěn)定、響應(yīng)值的線性范圍寬等。近年來各國(guó)都在研究開發(fā)新的檢測(cè)技術(shù)，進(jìn)一步擴(kuò)大了HPLC的應(yīng)用。常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器(UVD)、示差折光檢測(cè)器(RID)、電化學(xué)檢測(cè)器(ECD)、熒光檢測(cè)器等。阿司匹林（乙酰水楊酸）為常用的解熱抗炎藥，并被廣泛用于防治心腦血管病。市售的阿司匹林泡騰片的成分主要為乙酰水楊酸，輔料有玉米淀粉、碳酸鈣、膠體二氧化硅、糖精鈉、香精等。由于乙酰水楊酸很容易降

6、解為水楊酸，藥物中水楊酸含量測(cè)定常被用于阿司匹林藥物的質(zhì)量檢測(cè)。用液相色譜法可以很好地分離乙酰水楊酸和水楊酸，乙酰水楊酸和水楊酸的含量可以用外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量測(cè)定。[儀器與試劑]：1.戴安高效液相色譜儀固定相：C18鍵和多孔硅膠小球，自動(dòng)進(jìn)樣器，津騰過濾裝置，變色龍色譜工作站2.試劑雙蒸水，甲醇（色譜純），阿司匹林泡騰片（乙酰水楊酸，成品藥），乙酰水楊酸（分析純），冰醋酸[操作步驟]1、儀器的準(zhǔn)備工作A、泵①確保流動(dòng)相的充足，一般應(yīng)在所預(yù)計(jì)的消耗量之上加150ml，以保證儀器正常運(yùn)行。②流動(dòng)相要新鮮，一般情況下一次制得的

7、純水應(yīng)在連續(xù)的24小時(shí)內(nèi)用完，未用完應(yīng)棄掉。B、溶劑管道儀器開機(jī)前，更換流動(dòng)相后，管路中會(huì)有一些氣體，而這些氣體會(huì)對(duì)柱、泵及檢測(cè)器產(chǎn)生不同程度的影響，因此要求開機(jī)時(shí)每次都要對(duì)管路進(jìn)行脫氣。C、自動(dòng)進(jìn)樣器當(dāng)連續(xù)使用中需要更換樣品類型或流動(dòng)相粘度較大時(shí)，應(yīng)每次進(jìn)樣完成后進(jìn)行洗針。D、柱溫箱柱溫箱應(yīng)在打開電源且柱連接好后，及時(shí)設(shè)置為方法要求的溫度。E、檢測(cè)器為減少燈能量浪費(fèi)，檢測(cè)器應(yīng)在樣品準(zhǔn)備好完成后或基本完成時(shí)，且儀器系統(tǒng)按要求流動(dòng)相及流速平衡至少30分鐘以上后再打開，在完成自檢20分鐘以后方可開始樣品的分析。2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制稱取

8、乙酰水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品0.1g，精確稱量，置于10mL量瓶中，加0.6%冰醋酸的甲醇水溶液強(qiáng)烈振搖使溶解，并用0.6%冰醋酸的甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻。然后分別取30μL,50μL,100μL,150μL,200μL于5mL量瓶中，用0.6%冰醋酸的甲醇水溶液稀釋至