人群腦膜炎奈瑟菌帶菌檢驗(yàn)方法的研究.doc

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1、人群腦膜炎奈瑟菌帶菌檢驗(yàn)方法的研究作者:王海燕,邵榮標(biāo),畢誠(chéng),鄭春早【摘要】目的:研制一種能夠在低溫下保持腦膜炎奈瑟菌活性并具有增菌作用的培養(yǎng)基。方法:配制一種小牛血清“雙抗”培養(yǎng)基,用已知量A、C群腦膜炎奈瑟菌檢定其保菌和增菌效果,并用該法在正常人群中檢測(cè)帶菌率,以常規(guī)方法的檢測(cè)結(jié)果作配對(duì)比較。結(jié)果:應(yīng)用小牛血清“雙抗”培養(yǎng)基可使腦膜炎奈瑟菌在4℃24小時(shí)內(nèi)基本不死亡,部分菌株可生存8天,同時(shí)可使存活的細(xì)菌從3~9CFU/ml增加到(6~7)×107CFU/ml;對(duì)364名正常人檢測(cè),其檢出率達(dá)1.65%,而常規(guī)方法

2、檢出率為0(P<0.05)。結(jié)論:小牛血清“雙抗”培養(yǎng)基在4℃的不利條件下,有顯著保菌作用,同時(shí)具有顯著增菌作用?!娟P(guān)鍵詞】腦膜炎奈瑟菌;檢驗(yàn)方法;小牛血清;保菌;增菌[Abstract]Objective:Tomanufactureoneculturemedium(forshort:newmedium)whichcouldkeepthelifeofNeisseria(N.)meningitidisinlowtemperature,andcouldaugmentthenumberofN.meningitidis.

3、Methods:Oneculturemediumcontainingnewbovineserumandtwokindsofantibioticwasprepared.TheeffectsofkeepinglifeofN.meningitidisweredetectedbyknownnumberofAandCtypesofN.meningitidis.ThencarriersofN.meningitidisinthecrowdweredetected,comparedwiththeroutinedetectingmeth

4、odascontrol.Results:ThenewmediumcouldalmostkeepthelifeofN.meningitidisfor24hoursin4℃,andcouldaugmentthenumberofN.meningitidisfrom3~9CFU/mlto(6~7)×107CFU/mlin37℃.SomestrainsofM.meningitidiscouldlivefor8daysinthenewmediumin4℃.With364healthypersonsdetectedwiththene

5、wmedium,thepositiverateofcarryingN.meningitidiswas1.65%,butwithroutinedetectingmethod,thepositiveratewas0(P﹤0.05).Conclusion:Innfavourableconditionof4℃,thenewmediumcouldkeepthelifeofN.meningitidisdistinguishingly.Andinthefavourableconditionof37℃,thenewmediumhadt

6、hefunctionofaugmentingthenumberofN.meningitidisprominently.[Keywords]Neisseriameningitidis;Detectmethod;Newbovineserum;Keepthelifeofbacteria;Augmentthenumberofbacteria腦膜炎奈瑟菌對(duì)干燥、寒冷、熱、陽(yáng)光等非常敏感,在室溫中3小時(shí)就死亡[1],同時(shí)營(yíng)養(yǎng)要求也很高。因而對(duì)腦膜炎患者或帶菌者的檢查,常規(guī)的檢驗(yàn)方法需要用37℃3預(yù)溫的巧克力色血瓊脂平板進(jìn)行床邊接種

7、,并保溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),這種方法對(duì)人群帶菌狀況和流行病學(xué)的監(jiān)測(cè)尤其困難。為方便監(jiān)測(cè)并反映人群的真正帶菌狀況,就如何保持腦膜炎奈瑟菌的活性、提高檢出率,我們對(duì)所用培養(yǎng)基進(jìn)行了研究。1材料與方法1.1小牛血清瓊脂將市售血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制后121℃15分鐘滅菌,待冷卻至50℃左右時(shí),按10%加入小牛血清,作腦膜炎奈瑟菌活菌計(jì)數(shù)時(shí)傾注平板用。葡萄糖蛋白胨水:含1%葡萄糖、1%蛋白胨、0.5%氯化鈉,121℃15分鐘滅菌后備用。小牛血清“雙抗”培養(yǎng)基[1]:取上述制備的葡萄糖蛋白胨水溶液198ml、“雙抗”水溶液2ml(萬(wàn)古

8、霉素、多黏菌素B的濃度分別為660U/ml和5000U/ml)、無(wú)菌小牛血清200ml,充分混勻后,用無(wú)菌的10ml吸管分裝于無(wú)菌的試管中,每管1ml。血瓊脂平板:將市售血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基加水后121℃15分鐘滅菌,待冷卻至50℃左右時(shí),按10%加入新鮮的預(yù)溫至37℃的綿羊血,隨加隨混勻,再加入萬(wàn)古霉素和多黏菌素B溶液,使其含量分別

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