豬偽狂犬疫苗研究進(jìn)展ppt課件

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1、豬偽狂犬疫苗研究進(jìn)展吉藝寬豬偽狂犬病毒(Pseudorabiesvirus)偽狂犬病毒又名豬皰疹病毒1型，屬皰疹病毒甲亞科的成員。豬為病毒的原始宿主，并作為貯主，可感染其他動(dòng)物如馬、牛、綿羊、山羊、犬、貓及多種野生動(dòng)物，不感染人。一、病毒特性二、疾病的臨床癥狀妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎，以產(chǎn)死胎為主。新生仔豬大量死亡、15日齡以內(nèi)仔豬死亡率為100%。斷奶仔豬發(fā)病死亡，發(fā)病率20-40%，死亡率10-20%，主要表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀、拉稀、嘔吐等。母豬不發(fā)情、返情、屢配不孕等。公豬不育、發(fā)生睪丸腫脹、萎

2、縮，失去種用能力。育肥豬表現(xiàn)為慢性呼吸道癥狀、增重遲緩、飼料報(bào)酬降低、推遲上市的時(shí)間豬偽狂犬疫苗的研究進(jìn)展目前，疫苗接種是預(yù)防、控制甚至消滅豬偽狂犬病主要的措施之一。國內(nèi)外已研制出豬偽狂犬病的滅活疫苗、弱毒疫苗、基因缺失弱毒疫苗已經(jīng)相對(duì)成熟，而病毒載體重組疫苗、核酸疫苗、亞單位疫苗尚處于實(shí)驗(yàn)室研究階段。一、滅活疫苗滅活疫苗是將豬偽狂犬病毒接種于雞胚或細(xì)胞，當(dāng)病毒滴度達(dá)到要求時(shí)收獲病毒，滅活后加入免疫佐劑，從而制成滅活疫苗。我國目前廣泛使用的PR弱毒凍干疫苗(Bartha-k61)是一種gI／gE雙基因

3、缺失弱毒疫苗，由于該基因缺失而進(jìn)一步阻斷弱毒株回復(fù)毒力的可能性，所以大大提高了這種弱毒苗的安全性。1.自然缺失弱毒活疫苗的優(yōu)點(diǎn)。弱毒苗具有良好的免疫原性，而且價(jià)格低廉，至今仍在偽狂犬病的防控中起著重要的作用。2.自然缺失弱毒活疫苗的缺點(diǎn)。未經(jīng)充分致弱的弱毒苗的毒力可能會(huì)返強(qiáng)而導(dǎo)致疾病的流行；弱毒疫苗可建立潛伏感染，并有可能散毒。三、基因工程疫苗隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，豬偽狂犬病病毒的基因組結(jié)構(gòu)、基因缺失對(duì)病毒生物學(xué)性質(zhì)和免疫原性的影響得到了廣泛研究，豬偽狂犬基因工程疫苗的研究得到更深入的發(fā)展。豬偽狂犬基

4、因工程疫苗包括：基因工程缺失弱毒活疫苗、亞單位疫苗、核酸疫苗、重組病毒疫苗。（一）基因工程缺失弱毒活疫苗豬偽狂犬基因缺失主要包括對(duì)與毒力相關(guān)的基因如TK、RR、gE、gl等基因的缺失以降低病毒毒力；對(duì)糖蛋白基因如gG、gC、gD等基因的缺失以引入選擇標(biāo)記或阻止感染性病毒的產(chǎn)生，從而致弱豬偽狂犬病毒，同時(shí)又保持其較強(qiáng)的免疫原性。基因工程缺失疫苗的研制始于20世紀(jì)80年代初。1.第一代基因缺失疫苗。第一代基因缺失疫苗指缺失PRV一個(gè)主要的毒力基因獲得的疫苗。1984年，Kit等以PRVBUK為起始材料，并

5、以BUK疫苗株為親本，通過缺失TK（腺苷激酶）基因序列中的148bp片段，構(gòu)建出PRV的TK缺失株P(guān)RVBUK-d13株。試驗(yàn)證明，該疫苗對(duì)豬是安全的，并能提供有效的保護(hù)，5～6周齡豬在免疫接種后能產(chǎn)生中和抗體，在攻毒后能表現(xiàn)出再次免疫應(yīng)答。Quint等對(duì)PRVNIA-3株的US區(qū)進(jìn)行部分缺失(gE基因缺失)，構(gòu)建的PRV突變株能明顯降低PRV對(duì)小鼠和10周齡仔豬的毒力，可使免疫豬能抵抗強(qiáng)毒的致死攻擊。但該突變株對(duì)3日齡仔豬仍具有較強(qiáng)的毒力。TK基因缺失疫苗不僅能較好地免疫豬只，而且免疫豬后還可以通過

6、PCR的方法將免疫接種豬與自然感染豬區(qū)分開來。但是，由于TK基因?qū)儆诿傅鞍谆?，在體內(nèi)不能產(chǎn)生其相應(yīng)的抗體，因此僅缺失TK基因不能用血清學(xué)方法區(qū)別開免疫接種豬與自然感染豬，要將此區(qū)別開來必須缺失相應(yīng)的糖蛋白基因。鑒于此，許多學(xué)者在TK基因缺失的基礎(chǔ)上又缺失了相應(yīng)的糖蛋白基因而構(gòu)建了含TK基因缺失的雙缺失和多缺失疫苗株。2.第二代基因缺失疫苗。第二代基因缺失疫苗除了在TK基因引入了一個(gè)缺失外，在非編碼必需糖蛋白的基因內(nèi)引入了一個(gè)新的缺失?；虿迦胍粋€(gè)報(bào)告基因，這樣得到的突變株就不能產(chǎn)生被缺失的糖蛋白，因而

7、免疫動(dòng)物就不能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因此可以通過血清學(xué)方法將免疫接種豬與自然感染野毒的豬相區(qū)別。這也是第二代基因缺失疫苗的最顯著特點(diǎn)。還值得注意的是有些糖蛋白的缺失，可以進(jìn)一步降低毒力。第一個(gè)申請(qǐng)專利并注冊使用的PRV基因工程疫苗OM-NIVAC-PRV就是TK基因缺失疫苗。在我國，PRVEaTK-株基礎(chǔ)上構(gòu)建了PRVEaTK-/gG-、TK-/gE-疫苗株上述基因缺失疫苗的構(gòu)建成功，為偽狂犬病的根除計(jì)劃打下了物質(zhì)基礎(chǔ)。除此之外，人們還將注意力集中在核苷酸還原酶(RR)、蛋白激酶(PK)、堿性酸外切酶、脫氧

8、尿苷三磷酸激酶等與PRV毒力相關(guān)的基因上，試圖通過缺失這些基因，更進(jìn)一步地降低疫苗毒株的殘余毒力，從而使突變株更為安全。（1）基因工程缺失弱毒活疫苗優(yōu)點(diǎn)：都缺失了目的基因的幾百甚至幾千個(gè)堿基，缺失區(qū)域明確，所以它們返祖的可能性極小。PRV缺失株一般都缺失了一個(gè)或幾個(gè)毒力基因，所以大多數(shù)PRV缺失株對(duì)鼠、豬無毒力或僅有較低的毒力，但是，僅缺失TK基因的弱毒株對(duì)犢牛還有較低的毒力，而對(duì)貓、狗毒力較強(qiáng)，若同時(shí)再缺失gC或gE基因，則幾乎不表現(xiàn)出毒力。大多數(shù)的P