pdgfr-β在子癇前期患者胎盤(pán)中的表達(dá)及其意義

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1、PDGFR-P在子癡前期患者胎盤(pán)中的表達(dá)及其意義謝育娣（廈門(mén)大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科福建廈門(mén)361003）【中圖分類(lèi)號(hào)】R714.24+5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1672-5085（2012）48-0020-03【摘要】目的探討血小板源生K:因子受體beta（Plateletderivedgrowthfactorreceptorbeta,PDGFR-?庇子癇前期胎盤(pán)中的表達(dá)及其意義。方法采用RT-PCR方法研究40例子癇前期和25例正常妊娠胎盤(pán)組織中PDGFR-?mRNA的表達(dá);采用免疫組織化學(xué)法研究40例子癇前期和25例正常妊娠胎盤(pán)組織中PDGFR-?蛋白的表達(dá)及定位。結(jié)果子

2、癇前期患者PDGFR-?mRNA及蛋白表達(dá)均顯著高于正常妊娠組（P<0.05）o結(jié)論子癇前期組胎盤(pán)組織PDGFR-?的mRNA、蛋白高表達(dá)，PDGFR-?主要表達(dá)于絨毛毛細(xì)血管內(nèi)皮，引起胎盤(pán)血管的動(dòng)脈粥樣硬化改變（AS）,參與子癇前期的病理生理過(guò)程?！娟P(guān)鍵詞】子癇前期胎盤(pán)PDGFR-?RT-PCRAS子癇前期是妊娠期常見(jiàn)病，主要病理變化是全身小動(dòng)脈痙攣，可能導(dǎo)致全身多器官、多系統(tǒng)受損，胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩、死胎等不良后果，是圍產(chǎn)期母嬰死亡的主要原因之一。但其病因尚未明確。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)PDGFR過(guò)量表達(dá)，與血中的血小板源生長(zhǎng)因子結(jié)合產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)，導(dǎo)致胎盤(pán)及全身血管內(nèi)皮功能失調(diào)

3、，產(chǎn)生高血壓、蛋白尿等臨床表現(xiàn)［1-2］。木文檢測(cè)了PDGFR-?在子癇前期患者胎盤(pán)組織中的表達(dá)，以探討其在子癇前期中的作用和臨床意義。1資料與方法1.1研究對(duì)象和分組：選擇2008年10月至2009年6月于廈門(mén)大學(xué)附屬第一醫(yī)院剖宮娩的輕、重度子癇前期患者各20例。診斷標(biāo)準(zhǔn)參見(jiàn)《婦產(chǎn)科學(xué)》第6版［3］。另選取年齡和孕周匹配的正常孕婦25例作為對(duì)照組。所有病例均除外其它內(nèi)外科合并癥。病例組和對(duì)照組孕婦年齡和孕周差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（采用成組t檢驗(yàn)，t值分別為1.365和1.384,P均>0.05,見(jiàn)表1）。1.2標(biāo)本采集和處理：兩組孕婦分娩后立即取其胎盤(pán)母體面(臍帶附著處對(duì)側(cè))絨

4、毛膜板下絨毛組織約lOOmg,用冰生理鹽水沖洗血液后立即放入液氮,轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室后貯存于-80°C超低溫冰箱待行RT-PCR檢測(cè)。另于該部位處避開(kāi)梗死和餌化區(qū)取胎盤(pán)組織約1.0cm×1.0cm×0.5cm人小，立即置于10%福爾馬林固定24h，包埋，制作蠟塊，待行免疫組化及病理檢查。1.3實(shí)驗(yàn)方法RT-PCR檢測(cè)胎盤(pán)組織中PDGFR-?mRNA的表達(dá)(1)采用Trizol一步法抽提RNA(試劑購(gòu)自Invitrogen公司)，RNA濃度和純度經(jīng)核酸分析儀分析，A260/A280在1.7?2.1之間。(2)按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自Promega公司)操作步驟

5、吸取2μg總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。(3)PCR反應(yīng)：引物序列.?PCR反應(yīng)體系(25μl):cDNA0.25μg,MgCI21.5mmol/L,1.0×Buffer和dNTP各200μmol/L,Taq酶1.0U/25μLPDGFR-?和GAPDH上下游引物分別為0.2μmol八、0.1μmol/L,加去離子水至25μl。反應(yīng)條件：94°C變性30s,59°C退火45s,72°C延伸60s,35個(gè)循環(huán)，終末延伸10分鐘。引物及PCR反應(yīng)試劑由上海生物工程公司合成；(4)取PCR產(chǎn)物5μl電泳、ImageMasterVD

6、S-CL凝膠成像系統(tǒng)掃描，PDGFR-?和GAPDH的電泳條帶灰度積分比值表示PDGFR-?的相對(duì)表達(dá)含量。1.3.2免疫組化法測(cè)定胎盤(pán)組織中PDGFR-β的表達(dá)及定位免疫組化S-P法進(jìn)行測(cè)定，一抗為兔抗人PDGFR-β多克隆抗體，一抗稀釋度為1:100;二抗為鼠抗兔IgG。將蠟塊進(jìn)行切片、按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：光鏡(×100)下觀察，細(xì)胞膜或(和)細(xì)胞質(zhì)中有棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色。每張切片隨機(jī)選取高倍(×100)視野10個(gè)，用高清晰彩色病理圖像分析系統(tǒng)(HPIAS-100)測(cè)定切片圖像的陽(yáng)性反應(yīng)平均灰度值，即滴加上述一抗后

7、的每張陽(yáng)性染色切片圖像平均灰度值(包括絨毛組成區(qū)域背景區(qū))與陰性對(duì)照切片圖像的平均灰度值的差值。結(jié)果以平均灰度值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。1.4胎盤(pán)組織病理學(xué)檢查：將蠟塊切片，行HE染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察，比較對(duì)照組和子癇前期患者胎盤(pán)的病理變化。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，兩個(gè)樣本之間均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)的兩兩比較采用oneway-ANOVA檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用卡方檢驗(yàn)；兩變量相關(guān)分析采用Spea