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《pten基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達 》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、PTEN基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達【摘要】目的探討PTEN基因變異在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)生發(fā)展中的作用。方法應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT?PCR)技術(shù),對30例肝癌組織、30例癌旁組織和16例正常肝組織細(xì)胞中PTEN基因的表達情況進行了檢測和分析。結(jié)果肝癌組織中PTEN基因表達水平明顯低于癌旁組織和正常肝組織(F=6.785,q=4.269、4.549,P<0.05)。低分化肝癌組織中PTEN基因表達水平顯著低于高、中分化肝癌組織(t=3.266,P<0.01)。結(jié)論PTEN基因失活與肝癌發(fā)生密切相關(guān);PTEN基因表達水平與HCC惡性程度有明顯相關(guān)性
2、,提示其變異可以作為病人預(yù)后判斷的指標(biāo)?!娟P(guān)鍵詞】基因PTENRNA信使癌肝細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)[ABSTRACT]ObjectiveTostudytheroleofPTENvariationinthepathogenesisofhepatocellularcarcinoma(HCC).MethodsSemi?quantitivereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT?PCR)allivertissuesservedascontrols.ResultsTheexpressionlevelofPTENgeneintheHC
3、Ctissuesallivertissues(F=6.785;q=4.269,4.549;P<0.05).Inlouchlooderately?differentiatedHCCtissues(t=3.266,P<0.01).ConclusionTheinactivationofPTENiscloselyassociateda,andtheexpressionofPTENishighlyrelatedalignancyofthecancer,essenger;carcinoma,livercell;reversetranscriptasepolymerasecha
4、inreaction原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是一種高發(fā)性惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展涉及多基因、多分子水平的改變。PTEN基因又稱MMAC1或TEP1,是一個具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN蛋白在細(xì)胞的生長發(fā)育、信號傳導(dǎo)、遷移、凋亡過程中起到重要作用。PTEN基因的突變和失活存在于多種腫瘤中,如神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及消化系統(tǒng)腫瘤等。國外有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),肝癌組織中存在著PTEN基因的突變[1],國內(nèi)學(xué)者用免疫組化方法檢測了PTEN蛋白在肝癌中的表達,發(fā)現(xiàn)肝癌組織中存在較高比例的PTEN蛋白的陰性表達[2]。目前,有關(guān)PTEN的研究集中于基因的缺失和突變,而對于基因的表達則研究得
5、較少。本研究應(yīng)用半定量RT?PCR技術(shù)從mRNA水平檢測PTEN基因在肝癌、癌旁及正常肝組織中的表達情況,分析PTEN基因失活在肝癌發(fā)生中的作用。1材料與方法1.1材料標(biāo)本來自2001年12月~2002年12月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院及青島市市立醫(yī)院肝膽外科手術(shù)病人。30例HCC病人(HCC組),男22例,女8例,年齡33~71歲,平均52歲。術(shù)中取癌區(qū)、癌旁區(qū)(距癌邊緣2~5cm)組織標(biāo)本。16例肝血管瘤手術(shù)病人為正常對照組(CON組),其中男11例,女5例,年齡35~59歲,平均52歲。術(shù)中取正常肝組織標(biāo)本。所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)檢查證實。1.2方法1.2.1組織總RNA提取及
6、RT?PCR檢測PTEN表達用Trizol法提取組織總RNA,水溶后將其反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PTEN基因引物如下。外顯子1:5′?CGAAGCTTCCACCATGACCATCATCAAAG?3′;外顯子5:5′?ATCAAACCCTTTTGTGAAGA?3′;外顯子8:5′?TCTATACTGCAAATGCTATC?3′;外顯子9:5′?TTGGATCCTCAGACTTTTGTAATT?3′。分別以外顯子1、5為上游引物,8、9為下游引物,進行1?8、1?9、5?8、5?9四種組合,用RT?PCR法檢測PTEN基因不同片段在肝癌中的陽性表達率及表達水平。以甘油醛?3?磷酸脫氫
7、酶(GAPDH)作為內(nèi)參照(上游引物5′?CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA?3′;下游引物5′?ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA?3′)[3]。PCR反應(yīng)體積為25μL,反應(yīng)體系為10×Buffer2.5μL,MgCl21.5mmol/L,dNTP0.1mmol/L,TapDNA聚合酶1.0U,PTEN及GAPDH上下游引物各0.4μmol/L,cDNA模板2μL。PCR反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性3min;94℃45s,58℃45s,72℃1.5min,33個循環(huán);72℃延伸10