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1、PTEN基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)【摘要】目的探討PTEN基因變異在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)生發(fā)展中的作用。方法應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT?PCR)技術(shù)，對(duì)30例肝癌組織、30例癌旁組織和16例正常肝組織細(xì)胞中PTEN基因的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)和分析。結(jié)果肝癌組織中PTEN基因表達(dá)水平明顯低于癌旁組織和正常肝組織（F＝6.785，q=4.269、4.549，P<0.05）。低分化肝癌組織中PTEN基因表達(dá)水平顯著低于高、中分化肝癌組織(t=3.266,P<0.01)。結(jié)論P(yáng)TEN基因失活與肝癌發(fā)生密切相關(guān)；PTEN基因表達(dá)水平與HCC惡性程度有明顯相關(guān)性
2、，提示其變異可以作為病人預(yù)后判斷的指標(biāo)?！娟P(guān)鍵詞】基因PTENRNA信使癌肝細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheroleofPTENvariationinthepathogenesisofhepatocellularcarcinoma(HCC).MethodsSemi?quantitivereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT?PCR)allivertissuesservedascontrols.ResultsTheexpressionlevelofPTENgeneintheHC
3、Ctissuesallivertissues（F＝6.785;q=4.269,4.549;P<0.05）.Inlouchlooderately?differentiatedHCCtissues(t=3.266,P<0.01).ConclusionTheinactivationofPTENiscloselyassociateda,andtheexpressionofPTENishighlyrelatedalignancyofthecancer,essenger;carcinoma,livercell;reversetranscriptasepolymerasecha
4、inreaction原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是一種高發(fā)性惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展涉及多基因、多分子水平的改變。PTEN基因又稱MMAC1或TEP1，是一個(gè)具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN蛋白在細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、信號(hào)傳導(dǎo)、遷移、凋亡過程中起到重要作用。PTEN基因的突變和失活存在于多種腫瘤中，如神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)及消化系統(tǒng)腫瘤等。國(guó)外有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中存在著PTEN基因的突變［1］，國(guó)內(nèi)學(xué)者用免疫組化方法檢測(cè)了PTEN蛋白在肝癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肝癌組織中存在較高比例的PTEN蛋白的陰性表達(dá)［2］。目前，有關(guān)PTEN的研究集中于基因的缺失和突變，而對(duì)于基因的表達(dá)則研究得
5、較少。本研究應(yīng)用半定量RT?PCR技術(shù)從mRNA水平檢測(cè)PTEN基因在肝癌、癌旁及正常肝組織中的表達(dá)情況，分析PTEN基因失活在肝癌發(fā)生中的作用。1材料與方法1.1材料標(biāo)本來(lái)自2001年12月～2002年12月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院及青島市市立醫(yī)院肝膽外科手術(shù)病人。30例HCC病人（HCC組），男22例，女8例，年齡33～71歲，平均52歲。術(shù)中取癌區(qū)、癌旁區(qū)（距癌邊緣2～5cm）組織標(biāo)本。16例肝血管瘤手術(shù)病人為正常對(duì)照組（CON組），其中男11例，女5例，年齡35～59歲，平均52歲。術(shù)中取正常肝組織標(biāo)本。所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。1.2方法1.2.1組織總RNA提取及
6、RT?PCR檢測(cè)PTEN表達(dá)用Trizol法提取組織總RNA，水溶后將其反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PTEN基因引物如下。外顯子1：5′?CGAAGCTTCCACCATGACCATCATCAAAG?3′；外顯子5：5′?ATCAAACCCTTTTGTGAAGA?3′；外顯子8：5′?TCTATACTGCAAATGCTATC?3′；外顯子9：5′?TTGGATCCTCAGACTTTTGTAATT?3′。分別以外顯子1、5為上游引物，8、9為下游引物，進(jìn)行1?8、1?9、5?8、5?9四種組合，用RT?PCR法檢測(cè)PTEN基因不同片段在肝癌中的陽(yáng)性表達(dá)率及表達(dá)水平。以甘油醛?3?磷酸脫氫
7、酶（GAPDH）作為內(nèi)參照（上游引物5′?CTCAGACACCATGGGGAAGGTGA?3′；下游引物5′?ATGATCTTGAGGCTGTTGTCATA?3′）［3］。PCR反應(yīng)體積為25μL，反應(yīng)體系為10×Buffer2.5μL，MgCl21.5mmol/L，dNTP0.1mmol/L，TapDNA聚合酶1.0U，PTEN及GAPDH上下游引物各0.4μmol/L，cDNA模板2μL。PCR反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性3min；94℃45s，58℃45s，72℃1.5min，33個(gè)循環(huán)；72℃延伸10
