hplc測定桂枝湯不同配伍中桂皮酸和桂皮醛的含量

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1、HPLC測定桂枝湯不同配伍中桂皮酸和桂皮醛的含量【摘要】建立HPLC法測定桂枝湯中桂皮酸和桂皮醛含量的分析方法，研究配伍對桂枝湯中桂皮酸和桂皮醛含量的影響。［方法］采用L16（215）正交設計，以HPLC法測定桂皮酸和桂皮醛含量。［結果］不同配伍對桂枝湯中桂皮酸、桂皮醛含量有影響。［結論］該方法測定樣品成分含量方法準確，敏捷，數(shù)據(jù)可靠，為藥效學提供了科學定量依據(jù)。【關鍵詞】桂枝湯；桂皮酸；桂皮醛；配伍；HPLC法本研究引入正交設計,合理安排方中甘草、芍藥、大棗、生姜與桂枝配伍，采用HPLC法,測定了桂枝與方中其它藥物配伍后，其主要成分的含量變化，為進一步

2、研究桂枝湯的含量測定、配伍規(guī)律、作用機制等提供參考?！　?藥品與材料　　1.1儀器　　Agilent1100Series高效液相色譜儀；METTLERAE240電子分析天平；SB3200超聲波清洗器?！　?.2試劑　　　　流動相乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。桂皮酸、桂皮醛對照品由昆明海升林科技有限公司提供（批號分別為110786200503，110710200714，供含量測定）?！　?.3中藥材　　桂枝、芍藥、甘草、生姜、大棗由宜昌市眾生藥業(yè)有限公司提供（經(jīng)宜昌市藥品檢驗所魏俊德主任藥師鑒定上述藥材符合2005年同家藥典）?！　?

3、方法與結果　　2.1色譜條件　　色譜柱為NVCLEOSILC18（10μm，4.6mm×250mm），流動相為乙晴0.1%醋酸水溶液（33∶67），檢測波長為285nm，柱溫為35℃，流速為1.0ml·min,進樣量為10μl［2］。在此條件下，對照品和樣品色譜圖見圖1和圖2?！　?.2對照品及供試品溶液的制備　　2.2.1對照品溶液的配制　　精密稱取桂皮酸、桂皮醛對照品適量，分別置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，放置，濾過，作為貯備液。另取貯備液5ml，加甲醇稀釋至100ml，制成每1ml含桂皮酸44μg的對照品溶液。　　2.2.

4、2供試品溶液的制備　　按桂枝湯配方比例，精密稱取桂枝9g，芍藥9g，炙甘草6g，生姜9g，大棗4枚，加藥材5倍水，加熱回流2h，四層紗布過濾，精密量取2ml,置10ml容量瓶中，加甲醇定容至10ml,濾液放冷后過0.45μm微孔濾膜，得供試品溶液?！　?.2.3標準曲線　　精密量取桂皮酸和桂皮醛對照品溶液各2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl，分別注入高效液相色譜儀，以濃度(X)為橫坐標，色譜峰面積(Y)為縱坐標，求得回歸方程：桂皮酸和Y=7387.25x+9.467r=0.9999(n=6)、桂皮醛Y=9485.24x+22.414r=0

5、.9999(n=6)。表明桂皮酸在88.5μg·ml～531μg/ml、桂皮醛在95.14μg/ml～570.8μg/ml范圍內(nèi)線性良好?！　?.2.4精密度試驗　　精密量取對照品溶液各10μl，連續(xù)進樣5次，按上述色譜條件進樣測定，所得峰面積分別是桂皮酸：3281、3222、3280、3280、3283，RSD=0.8%（n=5）；桂皮醛：4584、4504、4576、4578、4575，RSD=0.8%（n=5）?！　?.2.5重復性試驗　　取某一份供試品溶液，按照2.2.3項下“精密量取2ml”同法操作，平行制備5份供試品溶液，分別于2、4、6h測

6、定桂皮酸和桂皮醛的峰面積，峰面積分別為桂皮酸：2167、2175、2175，RSD=0.2%（n=3）；桂皮醛8919、8891、8887，RSD=0.2%（n=3）。表明供試液在6h內(nèi)穩(wěn)定?！　?.2.6穩(wěn)定性試驗　　取某一份供試品溶液，在配制后0，2，4，6，8，12h進樣，測定桂皮酸、桂皮醛含量，其RSD=0.2%，表明6h內(nèi)溶液穩(wěn)定?！　?.2.7加樣回收率測定　　精密稱取桂枝0.8g，分別于10ml量瓶中.精密加入濃度為桂皮酸對照液1ml.按照2.2.3項下同法操作，依次測定含量，桂皮酸平均回收率為99.9%，RSD=0.1%（n=5）、桂皮醛

7、平均回收率為91.8%，RSD=1%（n=5）?！　?.3實驗方案　　為考察芍藥、甘草、生姜、大棗及兩兩協(xié)同作用對桂皮酸、桂皮醛含量的影響，合理安排各因素、因素水平，采用正交設計安排試驗。設置四因素，兩水平，以桂皮酸、桂皮醛含量作為考察指標。用L16（215）作表頭設計：　　2.3.1因素水平見表1。表1因素水平表（略）　　2.3.2實驗結果　　供試品溶液的制備按2.2.2項下方法，試驗安排及測定結果見表2。表2試驗安排及結果（略）　　3討論配伍是中醫(yī)用藥的特色和優(yōu)勢所在，開展方劑配伍規(guī)律的現(xiàn)代研究是中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的重要組成部分，對于繼承和發(fā)展中藥配伍

8、理論，更有效地指導臨床和中藥新產(chǎn)品創(chuàng)研具有重要意義。而方劑物質(zhì)基礎研究又是方劑配