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《不同濃度bme對大鼠胚胎脊髓神經(jīng)干細胞增殖和分化的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、不同濃度BME對大鼠胚胎脊髓神經(jīng)干細胞增殖和分化的影響【關(guān)鍵詞】神經(jīng)干細胞Effectofβmercaptoethanolonproliferationanddifferentiationofneuralstemcellsfromembryonicrats 【Abstraet】AIM:ToexploretheeffectsofdifferentconcentrationsofβMercaptoethanol(BME)inDFI2containing10mL/Lfetalco(FCS)ontheproliferationanddifferentiation
2、ofneuralstemcellsfromratembryonicspinalcord.METHODS:Econtaining10mL/LFCStoinduceNSCsinvitro,observedthecellsinthreephases,identifiedthedifferentiationusingimmunocytochemistrybyGFAPandNSE24hlater,andanalyzedtheresults.RESULTS:Proliferationmol/Lorlmmol/L)andFCSoronlybyFCS.Thediffere
3、ntiationrateofNSCstoneuronsinducedbyBME(0.5mmol/L)mol/L)significantlyincreasedto58%.ThedifferentiationrateofastrocytesinducedbyBME(0.5mmol/Lorlmmol/L)andFCSoronlybyFCSecelltoxicity.TheeffectofBMEbineduchbetterthanthatofusingonlyBMEorFCS. 【keyercaptoethanol(BME);neuralstemcells;ce
4、lldifferantiation 【摘要】目的：觀察含10ml/L血清的不同濃度的β一巰基乙醇(BME)對大鼠胚胎脊髓神經(jīng)干細胞增殖和分化的影響.方法：從大鼠胚胎脊髓中分離神經(jīng)干細胞，經(jīng)過2~3次傳代培養(yǎng)后，采用含10ml/L血清的不同濃度的BME分組對細胞進行體外誘導(dǎo)，選擇3個時段觀察細胞形態(tài)變化情況，誘導(dǎo)24h后采用GFAP和NSE免疫熒光染色法鑒定分化結(jié)果，同時對分化結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析.結(jié)果：用BME(0.5mmol/L)組和對照組血清誘導(dǎo)的神經(jīng)元的百分率分別為49%和10%，而BME(1mmol/L)組的神經(jīng)元分化率顯著升高至58%.由BME(
5、0.5mmol/L)組、BME(1mmol/L)組和對照組血清誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細胞分化率分別為46%，35%和83%.結(jié)論：BME有明顯誘導(dǎo)神經(jīng)干細胞向成熟神經(jīng)元分化的作用.配合血清使用可使細胞向神經(jīng)原分化的趨勢明顯優(yōu)于單純使用血清，兩者協(xié)同效應(yīng)明顯. 【關(guān)鍵詞】β一巰基乙醇(BME)；神經(jīng)干細胞；細胞分化 0引言 β巰基乙醇(βmereaptoethanol,BME)又名2巰基乙醇，是具有硫醇臭味的無色或微黃色透明液體，作為一種化學(xué)原料藥具有抗氧化作用.SCs)向神經(jīng)元方向分化的過程中起到關(guān)鍵作用,陳霞平等［2］對BME誘導(dǎo)MSCs作用也有相關(guān)報道.
6、MSCs在被誘導(dǎo)分化為成熟神經(jīng)細胞的過程中必定經(jīng)過神經(jīng)干細胞階段.因此，本研究將成功誘導(dǎo)MSCs的BME配合血清作用于神經(jīng)干細胞，以觀察其對神經(jīng)干細胞增殖過程及分化結(jié)果的影響. 1材料和方法 1．1材料 受孕SD大鼠(E10E12)由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供；DMEM/F12,N2添加劑均購自Gibco公司；EGF,bFGF購自Sigma公司，兔抗鼠NSE,GFAP,NESTIN一抗以及羊抗兔FITC,CY3熒光二抗均購自博士德公司；BME，多聚賴氨酸，胰蛋白酶均購自Sigma公司.倒置相差光學(xué)顯微鏡OLYMPUSIX70型. 1．2方法 1
7、．2．1NSC原代培養(yǎng)依照EM/F12為基本培養(yǎng)基，N2添加劑以1∶100稀釋，EGF,bFGF［5,6］終濃度為20μg/L.調(diào)整細胞密度約為9×105個/L后接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)，置于37℃,50ml/LCO2孵箱中培養(yǎng).每隔2~3d更換新鮮培養(yǎng)液，5~6d傳代. 1．2．2實驗分組將蓋玻片放入24孔板，并用多聚賴氨酸包備37℃過夜，使用前用PBS沖洗干凈.將傳至第3代的神經(jīng)干細胞克隆球用滴管吹打成單細胞懸液，僅使用基本培養(yǎng)基而不加入EGF，bFGF和N2，并稀釋至7.5×106個/L，接種到24孔板，每孔lmL細胞懸液.每6孔為一組，共分三個試驗組(A~
8、C組)和一個對照組(D組).A~C組分別使BME終濃度達到0.5,
