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《大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨向分化及體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨向分化及體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)作者：姚天華，李曉紅，熊曦州，饒國洲，石建峰，李昂【關(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；骨向分化；鈦網(wǎng)；組織工程 摘要：目的建立骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外分離培養(yǎng)體系，進(jìn)行骨向分化誘導(dǎo)，并將誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞復(fù)合鈦網(wǎng)體外成骨，為MSCs進(jìn)一步的臨床應(yīng)用研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法用密度梯度離心法分離大鼠骨髓MSCs，并對其形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行觀察。用誘導(dǎo)劑對MSCs向成骨細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。用掃描電鏡觀察骨向誘導(dǎo)后細(xì)胞復(fù)合鈦網(wǎng)的情況。結(jié)果用
2、密度梯度離心法成功分離獲得了高純度的骨髓MSCs。經(jīng)骨向誘導(dǎo)后，ALP和礦化結(jié)節(jié)染色陽性。掃描電鏡可觀察到骨向誘導(dǎo)后細(xì)胞復(fù)合在鈦網(wǎng)表面有礦化的基質(zhì)沉積。結(jié)論成功建立了大鼠骨髓MSCs體外分離和培養(yǎng)體系，MSCs能夠向成骨細(xì)胞分化，骨向誘導(dǎo)后細(xì)胞復(fù)合鈦網(wǎng)體外有礦化的基質(zhì)。 關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；骨向分化；鈦網(wǎng)；組織工程 Anexperimentalstudyofosteogenicdifferentiationand inductedinvitroofSDratbonemarrocell
3、ABSTRACT:ObjectiveToestablishanisolationandculturesystemofratbonemarrocells(MSCs),osteogenicdifferentiationandpoundtitaniummeshesinvitroinordertoverifythEirosteogenesis.MethodsDensitygradientcentrifugationSDratsandthEIrmorphologicalcharacteristicsinedunder
4、microscope.TheboneMSCsundericalandimmunocytochemicalstainingedtoverifytheirmultipotential.Cellsofosteogenicdifferentiationthatpoundedtitaniummeshesicroscope.ResultsHighpurityofboneMSCsineraliztionnodestainingmeshesicroscope,itatrix.ConclusionTheisolationan
5、dculturesystemofratboneMSCsmeshesatrix. KEYSCs)是骨髓中除造血干細(xì)胞以外的另一類干細(xì)胞類型，不但能增殖，在特定培養(yǎng)條件下還能實(shí)現(xiàn)跨系統(tǒng)分化。大量實(shí)驗(yàn)表明在體外可分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞等組織細(xì)胞[1]。由于其取材方便，易于體外分離培養(yǎng)擴(kuò)增，且自體獲取回輸后不會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，基因轉(zhuǎn)染效率高，轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定表達(dá)，因此骨髓MSCs被認(rèn)為是組織工程和基因工程的重要種子細(xì)胞。本研究在總結(jié)以往研究的基礎(chǔ)上，緊密結(jié)合臨床，探索有關(guān)骨髓MSCs誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞和鈦網(wǎng)復(fù)合成
6、骨細(xì)胞體外成骨，旨在探討成骨細(xì)胞鈦網(wǎng)移植物成骨的可行性。 1材料與方法 1.1主要材料及實(shí)驗(yàn)儀器SD大鼠(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心)、LG(低糖)DMEM培養(yǎng)液(GIBCO)、胎牛血清(FBS)(GIBCO)、地塞米松(GIBCO)、β甘油磷酸鈉(GIBCO)、抗壞血酸(GIBCO)、胰蛋白酶(1∶300)(GIBCO)、1.077×103g/L淋巴細(xì)胞分離液(上海恒信化學(xué)試劑有限公司)、商用純鈦網(wǎng)(西北有色金屬研究所)、JSM840型掃描電鏡(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院電鏡室)。 1.2骨髓MSCs體
7、外分離和培養(yǎng)取4周齡SD大鼠，無菌條件下取出脛骨和股骨，剪去骨骺端，用LGDMEM培養(yǎng)液沖出骨髓，離心收集細(xì)胞。將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，加入含等量淋巴細(xì)胞分離液的試管中，以800g×30min離心，吸取界面白膜層細(xì)胞，培養(yǎng)液清洗，1.0×108/L接種于培養(yǎng)瓶中，37℃，50mL/LCO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4d后更換培養(yǎng)液，以后每周換液2次。10-14d后待細(xì)胞達(dá)到70%-80%融合時(shí)，用2.5g/L的胰蛋白酶消化，傳代?！ ?.3骨髓MSCs誘導(dǎo)取第三代骨髓MSCs，按5×107/L的細(xì)胞密度制備細(xì)胞爬片，培養(yǎng)
8、3d貼壁后進(jìn)行誘導(dǎo)。骨向誘導(dǎo)液為含10%(體積分?jǐn)?shù))FBS，100mg/L青霉素，100mg/L鏈霉素，1×10-7mol/L地塞米松，10mmol/Lβ甘油磷酸鈉，50μg/L抗壞血酸的LGDMEM培養(yǎng)液。每4d換液一次，共誘導(dǎo)2周?！ ?.4鑒定堿性磷酸酶(ALP)染色：采用鈣鈷法ALP染色。分別選取骨向誘導(dǎo)1、2周的骨髓MSCs爬片，PBS洗滌后進(jìn)行染色，顯微鏡下觀察照相，黑染細(xì)胞為陽性細(xì)胞。以未誘導(dǎo)的細(xì)胞
