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《結(jié)腸康泰對結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜 egfr 及 pcna 表達的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、結(jié)腸康泰對結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PCNA表達的影響：張永鋒劉映芳張趙潔譚永港楊敏丁民【摘要】目的：觀察結(jié)腸康泰對結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PA表達的影響，從結(jié)腸黏膜修復(fù)角度探討結(jié)腸康泰的藥效機制。方法：雌性SD大鼠60只，隨機分為4組，分別為正常對照、模型、柳氮磺胺吡啶（SASP）及結(jié)腸康泰組，以5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）誘導(dǎo)大鼠形成結(jié)腸炎癥，免疫組化法觀察EGFR及PA的表達。結(jié)果：結(jié)腸康泰組大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PA高表達，與模型組比較有顯著性意義（P<0.05）。結(jié)論：上調(diào)EGFR表
2、達及細胞增殖水平是結(jié)腸康泰修復(fù)結(jié)腸黏膜損傷的愈合機制之一?！娟P(guān)鍵詞】表皮生長因子受體；增殖細胞核抗原；結(jié)腸康泰〔Abstract〕ObjectiveToobservetheeffectofJiechangKangtai(JCKT)recipeonexpressionofEGFRandPAofcolonicmucosaincolitisratsandexplorethepharmacologicalmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaaleSDratslydividedintofour
3、groups,namelynormalcontrol,pathological,solfasalazine(SASP)andJCKTgroups.Experimentalcolitismodelinratsmunohistochemistry.ResultsTheexpressionofEGFRandPAinJCKTgroupaybeoneofmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaalgroalgroalgroin，濾出頭煎，藥渣加蒸餾水適量，再煮沸30min，濾出二煎，合并2次濾液，
4、濃縮成200%置冰箱。柳氮磺胺吡啶（SASP），上海三維制藥有限公司提供，碾磨成粉，配成濃度為40mg/mL的混懸液；5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）購自Sigma公司；即用型鼠抗EGFR、PA抗體，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供；即用型SABC免疫組化染色試劑盒等購于武漢博士德生物工程有限公司。1.2實驗過程1.2.1造模方法[2]除正常組外，其余各組大鼠造模前禁食不禁水48h，禁食24h后提起鼠尾將其懸空，使掙扎以排出大腸遠端的大便，共2次，每次相隔6h以上，以氯氨酮（0.2mL/100g）腹腔注射麻醉
5、大鼠，用外徑為2mm的硅膠管插入鼠肛內(nèi)約8cm，經(jīng)管內(nèi)注入5%2，4，6-TNBs0.4mL（100mg/kg）+50%乙醇0.25mL，約10s灌注完畢。1.2.2動物給藥正常及模型組：每只每日給生理鹽水2mL；SASP組：SASP劑量為0.8g·kg-1·d-1；結(jié)腸康泰組：結(jié)腸康泰劑量為20g·kg-1·d-1，從造模后第1天開始，按以上劑量給大鼠每天灌胃1次，連續(xù)14d。1.2.3標(biāo)本的采集和處理至第15天，各組大鼠禁食8h后，用頸椎脫臼法處死大鼠，剖腹，取肛門至回盲部的結(jié)腸，沿腸系膜邊緣縱形剖開，每只動物在
6、遠端結(jié)腸、橫結(jié)腸和升結(jié)腸處至少各取1塊組織標(biāo)本（2mm×10mm），另于有炎癥或潰瘍處至少取1塊組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋、切片。1.3觀察指標(biāo)與方法免疫組化ABC法檢測EGFR、PA表達，根據(jù)試劑盒說明書進行操作。以PBS替代一抗體作為空白對照，已知陽性切片作為陽性對照。1.4統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計軟件處理，各組資料用x±s表示，采用非參數(shù)統(tǒng)計方法Wilcoxon秩和檢驗比較各組資料間的差異，P<0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1判定標(biāo)準(zhǔn)2.1.1EGFR采用半定量積分法計算染色積分，即分別對
7、每張切片的陽性細胞及陽性細胞著色程度進行分級記分，結(jié)果以兩項之和表示。陽性細胞率：每張切片檢測5個視野（×400），所見的陽性細胞分為0~4級（共5級）：0級為陰性，記0分；1級陽性細胞占1%~25%，記1分；2級陽性細胞占26%~50%，記2分；3級陽性細胞占51%~75%，記3分；4級陽性細胞占76%~100%，記4分。染色強度：顯微鏡下觀察，僅細胞核著藍色者為陰性，細胞漿或核膜上呈棕黃色為陽性；強度分0~3級（共4級）：0級為陰性，記0分；1級為弱陽性染色，記1分；2級為陽性染色，記2分；3級為強陽性染色，記3
8、分。2.1.2PA采用增殖細胞指數(shù)表示，每張切片計算5個不同視野中1000個細胞中的PA陽性細胞數(shù)，以100個細胞中陽性細胞數(shù)來表示增殖細胞指數(shù)（PA-labelingindices,LI）。2.2各組大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PA的表達正常大鼠結(jié)腸黏膜存在少量EGFR及PA標(biāo)記細胞。TNBs致大鼠結(jié)腸炎模型，結(jié)腸黏膜細胞EGFR表達及PA標(biāo)記細胞
