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《結(jié)腸康泰對(duì)結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜 egfr 及 pcna 表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、結(jié)腸康泰對(duì)結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PCNA表達(dá)的影響：張永鋒劉映芳張趙潔譚永港楊敏丁民【摘要】目的：觀察結(jié)腸康泰對(duì)結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PA表達(dá)的影響，從結(jié)腸黏膜修復(fù)角度探討結(jié)腸康泰的藥效機(jī)制。方法：雌性SD大鼠60只，隨機(jī)分為4組，分別為正常對(duì)照、模型、柳氮磺胺吡啶（SASP）及結(jié)腸康泰組，以5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）誘導(dǎo)大鼠形成結(jié)腸炎癥，免疫組化法觀察EGFR及PA的表達(dá)。結(jié)果：結(jié)腸康泰組大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PA高表達(dá)，與模型組比較有顯著性意義（P<0.05）。結(jié)論：上調(diào)EGFR表
2、達(dá)及細(xì)胞增殖水平是結(jié)腸康泰修復(fù)結(jié)腸黏膜損傷的愈合機(jī)制之一。【關(guān)鍵詞】表皮生長(zhǎng)因子受體；增殖細(xì)胞核抗原；結(jié)腸康泰〔Abstract〕ObjectiveToobservetheeffectofJiechangKangtai(JCKT)recipeonexpressionofEGFRandPAofcolonicmucosaincolitisratsandexplorethepharmacologicalmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaaleSDratslydividedintofour
3、groups,namelynormalcontrol,pathological,solfasalazine(SASP)andJCKTgroups.Experimentalcolitismodelinratsmunohistochemistry.ResultsTheexpressionofEGFRandPAinJCKTgroupaybeoneofmechanismsofrecoveryofcolonicmucosaalgroalgroalgroin，濾出頭煎，藥渣加蒸餾水適量，再煮沸30min，濾出二煎，合并2次濾液，
4、濃縮成200%置冰箱。柳氮磺胺吡啶（SASP），上海三維制藥有限公司提供，碾磨成粉，配成濃度為40mg/mL的混懸液；5%2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBs）購自Sigma公司；即用型鼠抗EGFR、PA抗體，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供；即用型SABC免疫組化染色試劑盒等購于武漢博士德生物工程有限公司。1.2實(shí)驗(yàn)過程1.2.1造模方法[2]除正常組外，其余各組大鼠造模前禁食不禁水48h，禁食24h后提起鼠尾將其懸空，使掙扎以排出大腸遠(yuǎn)端的大便，共2次，每次相隔6h以上，以氯氨酮（0.2mL/100g）腹腔注射麻醉
5、大鼠，用外徑為2mm的硅膠管插入鼠肛內(nèi)約8cm，經(jīng)管內(nèi)注入5%2，4，6-TNBs0.4mL（100mg/kg）+50%乙醇0.25mL，約10s灌注完畢。1.2.2動(dòng)物給藥正常及模型組：每只每日給生理鹽水2mL；SASP組：SASP劑量為0.8g·kg-1·d-1；結(jié)腸康泰組：結(jié)腸康泰劑量為20g·kg-1·d-1，從造模后第1天開始，按以上劑量給大鼠每天灌胃1次，連續(xù)14d。1.2.3標(biāo)本的采集和處理至第15天，各組大鼠禁食8h后，用頸椎脫臼法處死大鼠，剖腹，取肛門至回盲部的結(jié)腸，沿腸系膜邊緣縱形剖開，每只動(dòng)物在
6、遠(yuǎn)端結(jié)腸、橫結(jié)腸和升結(jié)腸處至少各取1塊組織標(biāo)本（2mm×10mm），另于有炎癥或潰瘍處至少取1塊組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋、切片。1.3觀察指標(biāo)與方法免疫組化ABC法檢測(cè)EGFR、PA表達(dá)，根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。以PBS替代一抗體作為空白對(duì)照，已知陽性切片作為陽性對(duì)照。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，各組資料用x±s表示，采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法Wilcoxon秩和檢驗(yàn)比較各組資料間的差異，P<0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1判定標(biāo)準(zhǔn)2.1.1EGFR采用半定量積分法計(jì)算染色積分，即分別對(duì)
7、每張切片的陽性細(xì)胞及陽性細(xì)胞著色程度進(jìn)行分級(jí)記分，結(jié)果以兩項(xiàng)之和表示。陽性細(xì)胞率：每張切片檢測(cè)5個(gè)視野（×400），所見的陽性細(xì)胞分為0~4級(jí)（共5級(jí)）：0級(jí)為陰性，記0分；1級(jí)陽性細(xì)胞占1%~25%，記1分；2級(jí)陽性細(xì)胞占26%~50%，記2分；3級(jí)陽性細(xì)胞占51%~75%，記3分；4級(jí)陽性細(xì)胞占76%~100%，記4分。染色強(qiáng)度：顯微鏡下觀察，僅細(xì)胞核著藍(lán)色者為陰性，細(xì)胞漿或核膜上呈棕黃色為陽性；強(qiáng)度分0~3級(jí)（共4級(jí)）：0級(jí)為陰性，記0分；1級(jí)為弱陽性染色，記1分；2級(jí)為陽性染色，記2分；3級(jí)為強(qiáng)陽性染色，記3
8、分。2.1.2PA采用增殖細(xì)胞指數(shù)表示，每張切片計(jì)算5個(gè)不同視野中1000個(gè)細(xì)胞中的PA陽性細(xì)胞數(shù)，以100個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)來表示增殖細(xì)胞指數(shù)（PA-labelingindices,LI）。2.2各組大鼠結(jié)腸黏膜EGFR及PA的表達(dá)正常大鼠結(jié)腸黏膜存在少量EGFR及PA標(biāo)記細(xì)胞。TNBs致大鼠結(jié)腸炎模型，結(jié)腸黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)及PA標(biāo)記細(xì)胞
