genistein對(duì)耐藥卵巢癌細(xì)胞skov3增殖、凋亡和順鉑敏感性的影響

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1、Genistein對(duì)耐藥卵巢癌細(xì)胞SKOV3增殖、凋亡和順鉑敏感性的影響【摘要】探討GenistEin對(duì)耐藥卵巢癌細(xì)胞SKOV3增殖、凋亡和順鉑敏感性的影響。方法采用MTT法檢測(cè)GenistEIn單用及合用順鉑對(duì)細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞儀分析Genistein及Genistein聯(lián)合順鉑對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響。結(jié)果Genistein對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖表現(xiàn)出濃度依賴性的抑制作用，并顯著提高了其對(duì)順鉑的敏感性（P<0.05）；0.625～5μg/ml順鉑與2.5～10μg/mlGenistein合用基本表現(xiàn)為協(xié)同作用。5、10μg/mlGenistein均可將細(xì)胞阻滯于G2/

2、M期并誘導(dǎo)一定程度的凋亡，10μg/mlGenistein還可進(jìn)一步的干擾S期進(jìn)程；當(dāng)順鉑與Genistein合用時(shí)，兩種藥物在干擾SKOV3細(xì)胞周期和誘導(dǎo)凋亡方面表現(xiàn)為顯著的協(xié)同效應(yīng)。結(jié)論Genistein能夠抑制耐藥卵巢癌細(xì)胞SKOV3的增殖，并顯著增強(qiáng)該細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。【關(guān)鍵詞】Genistein順鉑卵巢癌耐藥　　0引言　　腫瘤耐藥是卵巢癌患者生存率低的重要原因，因此迫切需要新型有效的化療方案。Genistein（又稱染料木黃酮）是一種有潛力的化療增敏劑，廣泛存在于大豆和多種中草藥中，具有預(yù)防腫瘤的作用。近來研究表明Genistein還可以增強(qiáng)多種耐藥腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的

3、敏感性[1,2]，但Genistein是否可以增強(qiáng)耐藥卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性尚未見報(bào)道。本文從增殖、凋亡和順鉑敏感性方面分析了Genistein對(duì)耐藥卵巢癌細(xì)胞SKOV3的影響?！　?材料與方法　　1.1材料　　人卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌細(xì)胞系SKOV3，由本科實(shí)驗(yàn)室保存，該細(xì)胞系對(duì)順鉑等多種藥物耐藥[3]。Genistein、二甲基亞砜（DMSO）購(gòu)自Sigma，Genistein用DMSO配成儲(chǔ)備液（10mg/ml），20℃保存；順鉑（齊魯制藥廠）；噻唑藍(lán)(MTT)購(gòu)自Amresco。細(xì)胞周期試劑盒為DNAPrepStainkit(BECKMANCOULTER)；Anne

4、xinVFITC/PI凋亡試劑盒為ApoptosisDetectionKit(Biovision)。全自動(dòng)酶標(biāo)儀為K3型(LabsystemsDragon)；流式細(xì)胞儀為ELITEESP型（BECKMANCOULTER）。　　1.2方法　　1.2.1順鉑、Genistein單藥對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的影響收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，8×103個(gè)/孔接種于96孔培養(yǎng)板，37℃、50ml/LCO2孵箱培養(yǎng)12h，細(xì)胞貼壁后棄去培養(yǎng)液，加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基200μl，順鉑組濃度為0.625、1.25、2.5、5、10、20μg/ml，Genistein組濃度為2.5、5、10、20、40、

5、80μg/ml，為評(píng)估DMSO對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，設(shè)6個(gè)DMSO組（濃度與Genistein各組DMSO含量一致），同時(shí)設(shè)對(duì)照組，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。繼續(xù)培養(yǎng)72h，每孔加入MTT(5mg/ml，20μl),繼續(xù)孵育4h后棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO150μl，振蕩10min，酶標(biāo)儀測(cè)吸光度(A490)，按以下公式計(jì)算：細(xì)胞增殖抑制率=（對(duì)照組A490值實(shí)驗(yàn)組A490值）/對(duì)照組A490值×100%，取6孔均值繪制濃度效應(yīng)曲線。　　1.2.2順鉑聯(lián)合Genistein對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的影響方法基本同前。順鉑選0.625、1.25、2.5、5μg/ml4個(gè)濃度;Genistein選2.5、5

6、、10、20、40μg/ml5個(gè)濃度，設(shè)對(duì)照、單藥、聯(lián)合共30種組合。用以下公式計(jì)算兩藥的相互作用:q=E(AB)/[EA+EBEA×EB]。其中E(AB)為兩藥合用的抑制率，EA和EB為各藥單用的抑制率，q>1.15為協(xié)同作用，0.85　　1.2.3順鉑、Genistein單藥及聯(lián)合對(duì)周期和凋亡的影響根據(jù)MTT結(jié)果，順鉑濃度選2.5μg/ml,Genistein選5.0、10.0μg/ml，設(shè)對(duì)照、單藥和聯(lián)合共6組。加藥48h后收集細(xì)胞，分別按DNAPrepStainKit試劑盒和ApoptosisDetectionKit試劑盒說明書進(jìn)行細(xì)胞固定、染色，上流式細(xì)胞儀分析。　

7、　1.3統(tǒng)計(jì)方法　　采用SPSS10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理?！　?結(jié)果　　2.1順鉑、Genistein單藥對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的影響　　順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用隨濃度的增加呈平緩的增強(qiáng)趨勢(shì)，當(dāng)濃度達(dá)10μg/ml以上時(shí)，順鉑對(duì)增殖的抑制率才急劇上升，并在20μg/ml時(shí)達(dá)到51.6%，見圖1，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)。而順鉑在2.5μg/ml濃度以下時(shí)，對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的抑制作用與對(duì)照組無顯著差異(P>