斑替枝孢生物學特性及致病性初步研究

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1、斑替枝孢生物學特性及致病性初步研究斑替枝孢生物學特性及致病性初步研究加州鱸魚（Micropterussalmonides）原名大口黑鱸，分類學上屬鱸形目（Perciformes），太陽魚科[1]，身體長而側扁，稍紡錘形，橫截面為橢圓形。全身覆蓋銀白色或淡黃色細密鱗片，但脊柱顏色較深，通常呈綠青色或淡黑色，同時沿側線附近常有黑色斑紋。腹部呈灰白色。背肉稍厚，墨綠色，體側青綠。生活在淡水湖泊，原產自美洲，1983年引進中國進行養(yǎng)殖，通過人工馴化后，性格較溫和，不喜歡跳躍，容易受到驚嚇。加州鱸魚通?？梢栽?%以下的咸淡水域中正常生長，水質要求每升水溶氧量在1.5mg以上，比鱸魚、鱖

2、魚耐低氧能力強[2]。鱸魚肉是高蛋白食物，維生素A和維生素B豐富，滋補肝腎，健脾和胃，而且對感冒止咳有很好的功效，能化痰止咳，含有豐富的微量元素鈣、鎂、鋅、硒等。加州鱸魚生長迅速，肉質鮮美，容易養(yǎng)殖，且經濟效益高，是中國常見的淡水養(yǎng)殖品種。草魚（Ctenopharyngodonidellus）屬鯉形目鯉科，是中國重要的淡水養(yǎng)殖魚類，它和鰱、鳙、青魚一起，構成了中國著名的四大家魚[3]?！　”狙芯克镁晔菑幕疾〖又蓣|魚體表分離，通過分子鑒定和形態(tài)鑒定，初步鑒定為斑替枝孢（Cladosporiumbantianum），屬真菌門（Fung）半知菌亞門（Deuteromycota）

3、絲孢綱（Hyphomycetes）叢梗孢目（Miniliales）暗色孢科（Dematiaceae）枝孢屬（Cladosporium）。能引起皮膚暗色絲孢霉病[4]，尤其侵染腦部引起腦囊腫或膿腫，少數(shù)為腦膜炎[5]。在PDA和PCA培養(yǎng)基上生長迅本文由.L.收集整理速，菌落扁平。鼠灰色絨毛狀，中央高凸，呈紐扣狀，表面有不規(guī)則皺褶，37℃生長良好。在Sabourand培養(yǎng)基上，菌落稍大，灰棕色絨毛狀，背面黑色。菌絲灰棕色，分生孢子橢圓形、梨形、鏈生[6]。　　為研究斑替枝孢的生物學特性和對其他淡水魚類的致病性，本試驗通過不同pH和不同溫度條件對該真菌的生長狀況和菌落大小的影響，

4、研究該真菌的生物學特性。同時將該真菌回復感染草魚和鯉魚，觀察真菌對草魚和鯉魚是否具有致病性，為淡水魚類的中草藥防治提供一定的理論依據(jù)。1材料與方法　　1.1材料　　該菌株分離自患病加州鱸魚體表潰爛處，在PDA培養(yǎng)基上純培養(yǎng)，將獲得的純培養(yǎng)菌株保存于5℃冰箱備用。菌株的分離與鑒定見魏福倫等[6]的報道?！　?.2方法　　1.2.1不同pH對斑替枝孢的影響將該真菌接種在pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0的PDA培養(yǎng)基上，在25℃下恒溫培養(yǎng)，觀察真菌菌株的生長狀況，每隔24h觀察一次，采用十字交叉法測定真菌菌落直徑并記錄下來。每個梯度做3個平板，試驗周

5、期為15d?！　?.2.2不同溫度對斑替枝孢的影響將該真菌接種在PDA培養(yǎng)基上，在溫度為5、10、15、20、25、30、35、40℃下培養(yǎng)，觀察真菌菌株的生長狀況，測量其直徑記錄下來。每個梯度做3個平板，測量方法同上。試驗周期為14d?！　?.2.3斑替枝孢的致病性用于回復感染的淡水魚是草魚和鯉魚，取自烏江網(wǎng)箱[7]。取回后置自然條件下培養(yǎng)，待魚在自然環(huán)境中生長狀況穩(wěn)定后進行回復感染。每組10尾魚裝到養(yǎng)魚箱中，每次試驗3箱魚，一箱為對照組，另兩箱為試驗組。對照組將真菌菌株接種在魚胸鰭下，放進魚箱中培養(yǎng)。試驗組一箱魚直接刮入真菌菌株進行培養(yǎng)，另一箱魚在魚胸鰭下接種真菌菌株。每

6、24h觀察一次，觀察該菌對淡水魚是否具有致病性。記錄每天的觀察結果，試驗周期為20d?！　?.2.4數(shù)據(jù)分析用SPSS_Statistics-v19.0m）。pH9.0時，真菌生長速度最快，菌落直徑達52.3mm，菌落最為致密，pH7.0、8.0時，真菌生長速度也相對較快，菌落直徑分別達51.3、52.0mm，因此最適生長的pH為9.0?！　?.2不同溫度對斑替枝孢的影響　　真菌的生長狀況在不同溫度下有明顯的差異，在溫度低于5℃和高于35℃時，均不能生長（接種菌直徑為2mm）。在10～30℃范圍內，該菌的生長速度隨溫度的升高而增快，在20℃時生長速度相對較快，菌落直徑達61.

7、7mm，菌落最為致密。25℃時，真菌生長速度也相對較快，菌落大小為58.7mm，但菌落不如20℃時致密。因此20℃為斑替枝孢的最適生長溫度。用SPSS軟件計算t值和Sig.（雙側）值，t值各不相同，Sig.（雙側）值均小于顯著水平0.05，與t檢驗的零假設不相符，存在顯著性差異（表2、圖2）。　　2.3斑替枝孢的致病性　　將真菌菌株接種于草魚和鯉魚，培養(yǎng)后觀察，發(fā)現(xiàn)此菌株對草魚和鯉魚的生長沒有明顯的影響，沒有引起淡水魚患病或死亡。在魚體的傷口周圍取材進行再培養(yǎng)，沒有發(fā)現(xiàn)埃里格孢，初步判斷斑替枝孢不感染草