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《斑替枝孢生物學(xué)特性及致病性初步研究.doc》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、加州餉魚(Micropterussalmonides)原名大II黑魴，分類學(xué)上屬勢形目(Perciformes),太陽魚科［1］,身體長而側(cè)扁，稍紡錘形，橫截面為橢圓形。全身覆蓋銀白色或淡黃色細密鱗片，但脊柱顏色較深,通常呈綠青色或淡黑色，同時沿側(cè)線附近常有黑色斑紋。腹部呈灰白色。背肉稍厚，墨綠色，體側(cè)青綠。生活在淡水湖泊，原產(chǎn)自美洲，1983年引進中國進行養(yǎng)殖，通過人工馴化后，性格較溫和，不喜歡跳躍，容易受到驚嚇。加州魴魚通常可以在1%以下的咸淡水域中正常生長，水質(zhì)要求每升水溶氧量在1.5mg以上，比餉魚、蹶魚耐低氧能力強
2、［2］。魴魚肉是高蛋白食物，維生素A和維生素B豐富，滋補肝腎，健脾和胃，而且對感冒止咳有很好的功效，能化痰止咳，含有豐富的微量元素鈣、鎂、鋅、硒等。加州魴魚牛長迅速，肉質(zhì)鮮美,容易養(yǎng)殖，且經(jīng)濟效益高，是中國常見的淡水養(yǎng)殖品種。草魚(Ctenopharyngodonidellus)屬鯽形冃鯽科，是中國重要的淡水養(yǎng)殖魚類，它和鰻、鯛、青魚一起，構(gòu)成了屮國著名的“四大家魚”［3］。本研究所用菌株是從患病加州餉魚體表分離，通過分子鑒定和形態(tài)鑒定，初步鑒定為斑替枝抱(Cladosporiumbantianum),屬真菌門(Fung)半
3、知菌亞門(Deuteromycota)絲抱綱(Hyphomycetes)叢梗抱冃(Miniliales)暗色抱科(Dematiaceae)枝砲屬(Cladosporium)o能引起皮膚喑色絲砲霉?。?］,尤其侵染腦部引起腦囊腫或膿腫，少數(shù)為腦膜炎［5］。在PDA和PCA培養(yǎng)基上生長迅速，菌落扁平。鼠灰色絨毛狀，中央高凸，呈紐扣狀，表面有不規(guī)則皺褶，37°C生長良好。在Sabourand培養(yǎng)基匕菌落稍大，灰棕色絨毛狀，背面黑色。菌絲灰棕色，分生抱子橢圓形、梨形、鏈生［6］。為研究斑替枝抱的生物學(xué)特性和對其他淡水魚類的致病性，本
4、試驗通過不同pH和不同溫度條件對該真菌的生長狀況和菌落大小的影響，研究該真菌的生物學(xué)特性。同時將該真菌回復(fù)感染草魚和鯉魚，觀察真菌對草魚和鯉魚是否具有致病性，為淡水魚類的中草藥防治提供--定的理論依據(jù)。1材料與方法1.1材料該菌株分離自患病加州魴魚體表潰爛處，在PDA培養(yǎng)基上純培養(yǎng)，將獲得的純培養(yǎng)菌株保存于5°C冰箱備用。菌株的分離與鑒定見魏福倫等⑹的報道。1.2方法1.2.1不同pH對斑替枝抱的影響將該真菌接種在pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11?0的PDA培養(yǎng)基上，在25°C下恒溫培養(yǎng)，觀察真菌
5、菌株的生長狀況，每隔24h觀察一次，采用十字交叉法測定真菌菌落直徑并記錄下來。每個梯度做3個平板，試驗周期為15do1.2.2不同溫度對斑替枝抱的影響將該真菌接種在PDA培養(yǎng)基上，在溫度為5、10、15、20、25、30、35、40°C下培養(yǎng)，觀察真菌菌株的生長狀況，測量其直徑記錄下來。每個梯度做3個平板，測量方法同上。試驗周期為14d。1.2.3斑替枝抱的致病性用于回復(fù)感染的淡水魚是草魚和鯉魚，取自烏江網(wǎng)箱［7］。取回后置自然條件下培養(yǎng)，待魚在自然環(huán)境中生長狀況穩(wěn)定后進行回復(fù)感染。每組10尾魚裝到養(yǎng)魚箱中，每次試驗3箱魚，
6、一箱為對照組，另兩箱為試驗組。對照組將真菌菌株接種在魚胸鰭下，放進魚箱中培養(yǎng)。試驗組一箱魚直接刮入真菌菌株進行培養(yǎng)，另一箱魚在魚胸鰭下接種真菌菌株。每24h觀察一次，觀察該菌對淡水魚是否具有致病性。記錄每天的觀察結(jié)果，試驗周期為20do1.2.4數(shù)據(jù)分析用SPSS_Statistics-v19.0win32軟件進行差異性計算，用SPSS軟件的單樣本t檢驗計算t值及Sig.（雙側(cè)）值。將Sig.（雙側(cè)）值與p值進行比較，p值表示概率，得出差異性是否顯著。2結(jié)果與分析2.1不同pH對斑替枝砲的影響由表1、圖1可知，斑替枝抱在pH
7、為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0的條件下均能生長。由表1可知，t值各不相同，Sig.（雙側(cè)）值均為0.000,小于顯著水平0.05,與t檢驗的零假設(shè)相符,即不同pH之間菌落生長速率存在顯著差異（接種菌餅均為2mm）opH9.0時，真菌生長速度最快，菌落直徑達52.3mm,菌落最為致密，pH7.0、8.0時，真菌生長速度也相對較快，菌落直徑分別達51.3、52.0mm,因此最適生長的pH為9.0。2.2不同溫度對斑替枝抱的影響真菌的生長狀況在不同溫度下有明顯的差異，在溫度低于5°C和高于35°C吋，
8、均不能生長（接種菌直徑為2mm）o在10?30°C范圍內(nèi)，該菌的生長速度隨溫度的升高而增快，在20°C時生長速度相對較快，菌落直徑達61.7mm,菌落最為致密。25°C時，真菌生長速度也相對較快，菌落大小為58.7mm,但菌落不如20°C時致密。因此20°C為斑替枝抱的最適生長溫度。用SP
