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《斑替枝孢生物學(xué)特性及致病性初步研究.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、加州餉魚(yú)(Micropterussalmonides)原名大II黑魴，分類(lèi)學(xué)上屬勢(shì)形目(Perciformes),太陽(yáng)魚(yú)科［1］,身體長(zhǎng)而側(cè)扁，稍紡錘形，橫截面為橢圓形。全身覆蓋銀白色或淡黃色細(xì)密鱗片，但脊柱顏色較深,通常呈綠青色或淡黑色，同時(shí)沿側(cè)線附近常有黑色斑紋。腹部呈灰白色。背肉稍厚，墨綠色，體側(cè)青綠。生活在淡水湖泊，原產(chǎn)自美洲，1983年引進(jìn)中國(guó)進(jìn)行養(yǎng)殖，通過(guò)人工馴化后，性格較溫和，不喜歡跳躍，容易受到驚嚇。加州魴魚(yú)通?？梢栽?%以下的咸淡水域中正常生長(zhǎng)，水質(zhì)要求每升水溶氧量在1.5mg以上，比餉魚(yú)、蹶魚(yú)耐低氧能力強(qiáng)
2、［2］。魴魚(yú)肉是高蛋白食物，維生素A和維生素B豐富，滋補(bǔ)肝腎，健脾和胃，而且對(duì)感冒止咳有很好的功效，能化痰止咳，含有豐富的微量元素鈣、鎂、鋅、硒等。加州魴魚(yú)牛長(zhǎng)迅速，肉質(zhì)鮮美,容易養(yǎng)殖，且經(jīng)濟(jì)效益高，是中國(guó)常見(jiàn)的淡水養(yǎng)殖品種。草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)屬鯽形冃鯽科，是中國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)，它和鰻、鯛、青魚(yú)一起，構(gòu)成了屮國(guó)著名的“四大家魚(yú)”［3］。本研究所用菌株是從患病加州餉魚(yú)體表分離，通過(guò)分子鑒定和形態(tài)鑒定，初步鑒定為斑替枝抱(Cladosporiumbantianum),屬真菌門(mén)(Fung)半
3、知菌亞門(mén)(Deuteromycota)絲抱綱(Hyphomycetes)叢梗抱冃(Miniliales)暗色抱科(Dematiaceae)枝砲屬(Cladosporium)o能引起皮膚喑色絲砲霉?。?］,尤其侵染腦部引起腦囊腫或膿腫，少數(shù)為腦膜炎［5］。在PDA和PCA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速，菌落扁平。鼠灰色絨毛狀，中央高凸，呈紐扣狀，表面有不規(guī)則皺褶，37°C生長(zhǎng)良好。在Sabourand培養(yǎng)基匕菌落稍大，灰棕色絨毛狀，背面黑色。菌絲灰棕色，分生抱子橢圓形、梨形、鏈生［6］。為研究斑替枝抱的生物學(xué)特性和對(duì)其他淡水魚(yú)類(lèi)的致病性，本
4、試驗(yàn)通過(guò)不同pH和不同溫度條件對(duì)該真菌的生長(zhǎng)狀況和菌落大小的影響，研究該真菌的生物學(xué)特性。同時(shí)將該真菌回復(fù)感染草魚(yú)和鯉魚(yú)，觀察真菌對(duì)草魚(yú)和鯉魚(yú)是否具有致病性，為淡水魚(yú)類(lèi)的中草藥防治提供--定的理論依據(jù)。1材料與方法1.1材料該菌株分離自患病加州魴魚(yú)體表潰爛處，在PDA培養(yǎng)基上純培養(yǎng)，將獲得的純培養(yǎng)菌株保存于5°C冰箱備用。菌株的分離與鑒定見(jiàn)魏福倫等⑹的報(bào)道。1.2方法1.2.1不同pH對(duì)斑替枝抱的影響將該真菌接種在pH為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11?0的PDA培養(yǎng)基上，在25°C下恒溫培養(yǎng)，觀察真菌
5、菌株的生長(zhǎng)狀況，每隔24h觀察一次，采用十字交叉法測(cè)定真菌菌落直徑并記錄下來(lái)。每個(gè)梯度做3個(gè)平板，試驗(yàn)周期為15do1.2.2不同溫度對(duì)斑替枝抱的影響將該真菌接種在PDA培養(yǎng)基上，在溫度為5、10、15、20、25、30、35、40°C下培養(yǎng)，觀察真菌菌株的生長(zhǎng)狀況，測(cè)量其直徑記錄下來(lái)。每個(gè)梯度做3個(gè)平板，測(cè)量方法同上。試驗(yàn)周期為14d。1.2.3斑替枝抱的致病性用于回復(fù)感染的淡水魚(yú)是草魚(yú)和鯉魚(yú)，取自烏江網(wǎng)箱［7］。取回后置自然條件下培養(yǎng)，待魚(yú)在自然環(huán)境中生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定后進(jìn)行回復(fù)感染。每組10尾魚(yú)裝到養(yǎng)魚(yú)箱中，每次試驗(yàn)3箱魚(yú)，
6、一箱為對(duì)照組，另兩箱為試驗(yàn)組。對(duì)照組將真菌菌株接種在魚(yú)胸鰭下，放進(jìn)魚(yú)箱中培養(yǎng)。試驗(yàn)組一箱魚(yú)直接刮入真菌菌株進(jìn)行培養(yǎng)，另一箱魚(yú)在魚(yú)胸鰭下接種真菌菌株。每24h觀察一次，觀察該菌對(duì)淡水魚(yú)是否具有致病性。記錄每天的觀察結(jié)果，試驗(yàn)周期為20do1.2.4數(shù)據(jù)分析用SPSS_Statistics-v19.0win32軟件進(jìn)行差異性計(jì)算，用SPSS軟件的單樣本t檢驗(yàn)計(jì)算t值及Sig.（雙側(cè)）值。將Sig.（雙側(cè)）值與p值進(jìn)行比較，p值表示概率，得出差異性是否顯著。2結(jié)果與分析2.1不同pH對(duì)斑替枝砲的影響由表1、圖1可知，斑替枝抱在pH
7、為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0的條件下均能生長(zhǎng)。由表1可知，t值各不相同，Sig.（雙側(cè)）值均為0.000,小于顯著水平0.05,與t檢驗(yàn)的零假設(shè)相符,即不同pH之間菌落生長(zhǎng)速率存在顯著差異（接種菌餅均為2mm）opH9.0時(shí)，真菌生長(zhǎng)速度最快，菌落直徑達(dá)52.3mm,菌落最為致密，pH7.0、8.0時(shí)，真菌生長(zhǎng)速度也相對(duì)較快，菌落直徑分別達(dá)51.3、52.0mm,因此最適生長(zhǎng)的pH為9.0。2.2不同溫度對(duì)斑替枝抱的影響真菌的生長(zhǎng)狀況在不同溫度下有明顯的差異，在溫度低于5°C和高于35°C吋，
8、均不能生長(zhǎng)（接種菌直徑為2mm）o在10?30°C范圍內(nèi)，該菌的生長(zhǎng)速度隨溫度的升高而增快，在20°C時(shí)生長(zhǎng)速度相對(duì)較快，菌落直徑達(dá)61.7mm,菌落最為致密。25°C時(shí)，真菌生長(zhǎng)速度也相對(duì)較快，菌落大小為58.7mm,但菌落不如20°C時(shí)致密。因此20°C為斑替枝抱的最適生長(zhǎng)溫度。用SP
